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不同产地黄连外观物性特征量化和内在品质评价 黄连是黄连科植物的一种干燥的祖先，被称为c.dyneia或yunia粉莲c.leeta。雅连濒临灭绝,云连产量很小,目前黄连的主流商品是味连,因此本课题针对味连进行分等研究。味连主产于重庆石柱、湖北利川、四川洪雅、峨眉,彭州、大邑等地,其中重庆石柱和湖北利川为道地产区。 自古以来,黄连为中医临床常用品,历代医家也总结了一系列传统质量评价的术语,归纳为(味连)“川产者佳”、“根型如鹰,鸡之爪而坚实,连珠成结,色黄”等,即道地性、外观、性状、质地、颜色等决定味连的质量。在国家医药管理局和卫生部1984年3月颁发的《七十六种药材商品规格标准》[国药联材字(84)第72号文附件中,黄连(味连)药材分为2个等级。然而,作者经过多个产地调研发现,目前味连基本均按照统货收购和销售,过去的分等标准名存实亡。作者认为传统的药材分等,不仅是商品学上体现药材优价的依据,而且在药材质量控制上具有客观存在的规律,必须深入挖掘药材等级的科学内涵。本研究借鉴味连传统质量评价指标,进行客观量化研究,如测定药材大小(包括总长度、总宽度、主根长度、主根直径、分枝个数、分枝长度、分枝直径、过桥长度和质量)、颜色(包括外部颜色和内部颜色),同时结合内在成分含量作为味连药材等级的评价指标,采用主成分分析和聚类分析对测定结果进行分析,判断味连分等情况。 1 材料表面 1.1 高效液相色谱法测定 游标卡尺(量程0~150 mm,精度0.02 mm)(成都成量工具有限公司);CR-410色彩色差计(日本柯尼卡美能达有限公司);FW135型中草药粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司);Agilent 1200高效液相色谱仪,包括四元泵、DAD检测器、柱温箱、自动进样器、色谱工作站(美国 Agilent公司);Welchrom-C18色谱柱(4.6 mm ×250 mm,5 μm);BS200S型精密电子天平(北京赛多利斯天平有限公司);PS-80超声波清洗机(深圳市洁康洗净电器有限公司);PHS-3C型酸度计(上海日岛科学仪器有限公司)。 1.2 其他试剂的分析 色谱乙腈(美国Fisher公司);乐百氏纯净水;其他试剂:甲醇、盐酸、磷酸二氢钾、十二烷基硫酸钠均为分析纯;盐酸小檗碱对照品(中国食品药品检定研究院,批号 110713-200208)。 1.3 味连药材鉴定 课题组于2011年10—11月在产地进行调研并随机收购味连药材,共14批。经成都中医药大学卢先明教授鉴定为C.chinensis的干燥根茎。药材来源见表1。 2 方法和结果 2.1 味连色泽测定 2.1.1味连大小的测量 从每批味连药材中,随机抽取30个样本,用游标卡尺测量样本的总长度(主根最顶端至最长分枝的末端)、总宽度(样本平放投影至平面最宽处)、主根长度、主根直径(最宽处)、分枝数目、分枝长度、分枝直径(最宽处)、过桥长度,并称重。计算平均值见表2。 2.1.2味连颜色的测量 从每批味连药材中,随机抽取干燥样品数个,用色彩色差计直接测定外部的色度值;内部颜色不能直接测定,粉碎后90%以上过30目筛,未能过30目筛的与已过筛的粉末合并,混合均匀,测定色度值。仪器参数:光源D65,标准观察角度2°,照明口径50 mm;大于光源口径的烧杯装盛样品,样品装盛厚度不低于2 cm,室温下测定;数据用L*a*b*色空间法表示。其中E*ab为药材的总色值,L*为亮度值,a*红绿色度坐标,b*为黄蓝色度坐标,根据公式:E?ab=L?2+a?2+b?2????????????√E*ab=L*2+a*2+b*2,可算出物体的总色值,见表3。 2.2 内部质量分析 主要参考《中国药典》2010年版一部黄连项下,采用一测多评方法测定各批次药材中表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量。 2.2.1 流动相4.1% 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(50∶50)(每100 mL中加十二烷基硫酸钠0.4 g,再以磷酸调节pH为4.0)为流动相;检测波长为345 nm。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5 000。 2.2.2 对照溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品适量,加甲醇制成每1 mL含90.5 μg的溶液,即得。 2.2.3 超声法制备醇-盐酸溶液 分别精密称定14批味连药材粉末(过2号筛)约0.2 g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇-盐酸(100∶1)的混合溶液50 mL,密塞,称定质量,超声处理(功率250 W,频率40 kHz)30 min,放冷,再称定质量,用甲醇补足减失的质量,摇匀,滤过,精密量取续滤液2 mL,置10 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,取续滤液,即得。 2.2.4 相色谱法 精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL,