细胞培养的基本方法演示文稿.pptVIP

4、净化工作区不应存放不必要的物品，以保持洁净气流型不受干扰； 5、用后工作台要用75％酒精擦洗，以备后面工作人员使用； 6、经常注意工作区上方微压表的指示，及时更换滤器。 本文档共66页；当前第31页；编辑于星期二\5点22分 六、 培养细胞的取材 取材组织用培养液浸泡，4度运送，24h内尽快培养。 取材无菌操作，避免对组织的机械损伤，尽量去除脂肪、神经、结缔、坏死组织，污染组织可用青链霉素和制霉菌素漂洗。 原代取材同时保留组织学和电镜标本，对供体来源、部位及一般情况做记录。 欲从组织中获得大量生长良好的细胞，须将组织分散开，使细胞解离出来。 常用方法有机械法和化学法。 本文档共66页；当前第32页；编辑于星期二\5点22分 第二节 培养细胞的观察 本文档共66页；当前第33页；编辑于星期二\5点22分 组织块培养法 将组织剪成小块后，接种于培养瓶，24小时贴壁后，细胞就从组织周围长出。 培养瓶底预先涂以胶原薄层，以利上皮细胞的生长。 如需做组织染色或电镜检查，可将组织可放入小盖玻片上后再放进培养瓶培养。 换液需轻巧，以免组织块漂起，细胞死亡 本文档共66页；当前第34页；编辑于星期二\5点22分 消化培养法 采用前述的组织消化分散法。将妨碍细胞生长的细胞间质去除，使细胞分散，形成悬液，按不同浓度接种培养瓶培养。 本文档共66页；当前第35页；编辑于星期二\5点22分 密度抑制（Density inhibition）或接触抑制（Ccontact inhibition） 1958年Abercrombie 等学者提出的一种现象，培养细胞再生长过程中多发生分裂增殖，细胞移动而相互靠近，这时某些细胞可移向其他方向，保证细胞不会重叠，一但接触，这种活动即可停止。 所谓接触抑制实际使细胞汇合形成单层时，细胞变得拥挤，与培养液接触的表面区域也相应减少，营养成分消耗，其分裂也将停止。 本文档共66页；当前第36页；编辑于星期二\5点22分 培养细胞的生长过程 1） 原代（初代）培养期：从机体取下组织培养到第一次传代，此代细胞保持异质性，细胞种类较多，接近原组织细胞种类。维持时间，因细胞种类不同，一般1-4周。 本文档共66页；当前第37页；编辑于星期二\5点22分 2） 传代期培养：初代培养的细胞生长到一定程度，即可连接传代，使其连续生长。 一般正常二倍体细胞，不加附加条件，可传代30-50代，此时可发生染色体丢失、突变、细胞增殖变慢、停止分裂，进入衰退期，我们称之有限细胞系。这一转折点有人称之危象临界点（crisis） 有些细胞的少数后代，或通过人工条件转化的细胞可通过这一期，获得持久的增殖传代能力，我们称细胞系，或无限细胞系，即一般通称的细胞系。 本文档共66页；当前第38页；编辑于星期二\5点22分 （3） 衰退期：传代细胞到达一定代数，即发生增殖缓慢，逐渐停止，进而发生衰退、死亡，多数传代细胞（或叫有限细胞系），不能通过所谓的“crisis（危象临界点），导致最终死亡，这一现象可能说明生物学衰老的细胞学基础。 人胚胎成纤维细胞可以进行60代增殖，而80岁老人的肺成纤维细胞仅传代了16代后便死亡。表皮细胞寿命4-10天；红细胞3周-3个月，白细胞5-7天，神经细胞数年或更多。 本文档共66页；当前第39页；编辑于星期二\5点22分 本文档共66页；当前第40页；编辑于星期二\5点22分 本文档共66页；当前第41页；编辑于星期二\5点22分 本文档共66页；当前第42页；编辑于星期二\5点22分 本文档共66页；当前第43页；编辑于星期二\5点22分 本文档共66页；当前第44页；编辑于星期二\5点22分 实体显微镜（解剖镜） 倒置显微镜 生物显微镜 照相设备 对培养材料进行细胞学鉴定和研究 2、显微镜观察 本文档共66页；当前第45页；编辑于星期二\5点22分 本文档共66页；当前第46页；编辑于星期二\5点22分 3、细胞计数法（cell counting） 用血细胞计数板计数细胞悬液中的细胞数目，以测定细胞增殖和调整细胞浓度的一种方法。 本文档共66页；当前第47页；编辑于星期二\5点22分 细胞培养的基本方法演示文稿 本文档共66页；当前第1页；编辑于星期二\5点22分 细胞培养的基本方法 本文档共66页；当前第2页；编辑于星期二\5点22分 第一节 无菌操作技术 第二节 培养细胞的观察 第三节 细胞培养中常用的染色方法 第四节 细胞培养的污染和检测 主 要 内 容 本文档共66页；当前第3页；编辑于星期二\5点22分 教学目的和要求 重点和难点： 掌握细胞培养中无菌操作技术及操作过程中需要注意哪些问题； 预防污染是无菌操作的关键。 本文档共6