实验用斑马鱼质量控制第4部分：组织形态学评价方法.pdfVIP

组织形态学评价 1. 范围 本标准确立了实验用斑马鱼组织形态学评价的规范流程，包括标本采样、检测频率、检 测程序、检测内容及技术方法、结果判定等要求。 2. 规范性引用文件 下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适 用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 39649-2020 实验动物 实验鱼的质量控制 3. 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 实验用斑马鱼 （laboratory zebrafish）：经人工饲养、繁育、不携带所规定的鱼的烈 性传染病病原和与人共患病的病原，遗传背景明确或者来源清楚的用于科学研究、教学、生 产、检定以及其他科学实验的斑马鱼。 4. 检查程序 检查程序见图 1。 1 图1 5 检查内容及技术方法 5.1 检查内容 5.1.1 活体检查 观察样本鱼体表、色泽、营养、发育和活动情况。 5.1.2 形态检查 肉眼观察样本鱼形态，检查鳞片、皮肤、皮下、侧线，机体外观形态及功能状况。检查鳃 外侧、内侧和鳃片，检查鳃弓、鳃丝。检查口腔，有无寄生虫或其包囊。 5.1.3 组织学检查 2 样本鱼麻醉处死后进行解剖，对胸体腔及腔内组织器官利用解剖镜进行形态学检查。利 用光学显微镜，对组织器官进行组织形态学分析。 5.2 检查方法 5.2.1 取材 5.2.1.1 胸腹腔内器官 将标本鱼进行麻醉后捞出，用纸吸干鱼表面水渍，将斑马鱼置于培养皿中，腹部朝上， 用解剖剪在泄殖孔与体轴垂直方向剪一小口，再将鱼侧卧，自泄殖孔向背方剪到脊柱，沿测 线下方剪至鳃盖后源，再至鳃盖后缘剪至下颚。分别取胸腹腔内组织器官，包括心脏、肝、脾、 肾脏、胃肠、精巢或卵巢、鳔、胆囊、膀胱。 5.2.1.2 脑 利用解剖镜，使用镊子挑去脑骨肌肉，在 PBS 中剥离脑组织。 5.2.1.3 眼球 解剖剪剪开鳃盖，取出眼球。 5.2.1.4 脊髓 分别从头部和尾部与躯干交接处的脊柱剪断，用镊子从前端端口夹出脊髓，涂片。 5.2.1.5 肌肉 3 用镊子剥离皮肤与肌肉组织，取出肌肉组织。 5.2.2 制作石蜡切片 组织固定后，石蜡包埋，并进行常规石蜡制片。 5.2.3 HE 染色 HE 染色，光镜观察组织形态情况。 6 检查结果及结论 合格判定：所有被检样本鱼的活体检查、形态检查和组织学检查均未检出明显的病理变化， 或活体检测或形态检查 现轻度异常，组织学检查未检出明显的病理变化，该实验用斑马鱼 群判为合格。 不合格判定：当被检样本鱼的活体检查、形态检查和组织学检查均 现一尾及一尾以上明显 的感染性病变，或 现两尾及两尾以上明显的病变时，则判定该实验用斑马鱼群为不合格， 并注明病变的比率。 4