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全血血浆分离时间对凝血因子活性的影响 美国血液研究所（aabb）要求血液在血液采集后6小时（acd-b）8小时（cpda储存溶液）中分离，并快速冷冻。我国实行无偿献血后,采血方式已发生转变,现主要依靠流动采血模式,采血时间又主要集中在节假日和下午下班后为献血高峰。由此带来所采集的血液常常无法在6～8h内制备成FFP。研究超出规定时间内分离的血浆中不稳定凝血因子的活性水平,当FFP不能满足临床需要时,采用较为合适的普通冰冻血浆替代疗法成为必要。本研究对在(4±2)℃条件下,CPDA保存液保存的全血,分析不同时间段分离的血浆中不稳定凝血因子活性水平报告如下: 1 材料和方法 1.1 分组、离体、人工分离血浆 20份合格献血员,年龄20～48岁,每人采集CPDA保存液保存的全血200ml,采血后每袋平均分成6小袋,作为6个不同时间段分离血浆的实验组。及时取1袋于(4±2)℃离心3000r/min离心10min,分离的血浆于-50℃快速冰冻保存于-30℃专用冰箱中,作为对照组。其余5组保存在(4±2)℃的专用贮血冰箱中,分别于4h、8h、12h、24h及48h,按对照组的离心和保存条件分离血浆并保存。 1.2 解冻fv和f 在-30℃保存30d后,取出保存的各组样本,于37℃水浴箱中快速解冻,马上检测FV和FⅧ。凝血因子测定方法严格按照SYSMEX CA-6000全自动血凝分析仪操作说明和试剂要求进行检测。 1.3 u3000仪器 全血保存采用日本SANYO MBR-1404GR(4±2)℃专用贮血冰箱,血浆保存采用SANYO MDF-u4510-30℃专用血浆保存冰箱,分离血浆用BECKMAN J6-MI 4℃血浆分离机,凝血因子检测采用SYSMEX CA-6000全自动凝血分析仪及原装试剂,CPDA保存液由长春泰尔医用器具有限公司的“生复”血袋提供。 1.4 统计处理 2 血浆与0h分离的血浆的比较 保存在(4±2)℃的专用贮血冰箱条件下,4h分离的血浆与0h分离的血浆比较,FⅤ差别无显著性(t=0.265,P0.05),FⅧ差别无显著性(t=0.340,P0.05);8h分离的血浆与0h分离的血浆比较,FⅤ差别无显著性(t=0.516,P0.05),FⅧ差别无显著性(t=0.997,P0.05);12h分离的血浆与0h分离的血浆比较,FⅤ差别无显著性(t=0.632,P0.05),FⅧ差别无显著性(t=1.729,P0.05);24h分离的血浆与0h分离的血浆比较,FⅤ差别无显著性(t=1.334,P0.05),FⅧ差别有显著性(t=4.921,P0.01);48h分离的血浆与0h分离的血浆比较,FⅤ差别有显著性(t=6.921,P0.01),FⅧ差别有显著性(t=7.177,P0.01)。各组的活性比较,见表1。 3 ffp活性的变化 FFP是采血后在6～8h之内,经4℃离心后分离血浆,并快速冰冻保存。而普通冰冻血浆主要来源于保存期已超过6～8h的全血中分离出来的血浆,其次是在全血有效期以内分离出来的血浆,三是保存期超过一年的FFP转为普通冰冻血浆。两者区别主要在于不稳定凝血因子的含量,除了FⅤ和FⅧ以外,普通冰冻血浆中大多数凝血因子都是稳定的。 由于现有采血模式的转变,无偿献血人群主要集中在节假日和下班后在流动采血车采集血液为主,因此在时间上难以保证6～8h内将血浆分离并冰冻保存,从而出现大量普通冰冻血浆,另一方面FFP又难以满足临床需要。因此分析超出6～8h范围以外分离的血浆中的不稳定凝血因子的含量,对于合理采用普通冰冻血浆替代FFP的疗法非常必要。 FⅤ被认为是一种不稳定的凝血因子,但本实验结果却显示,在(4±2)℃保存条件下采用CPDA血液保存液保存的全血24h时分离的血浆,与及时分离的FFP比较FⅤ活性水平差别无显著性。与采用ACD-B血液保存液的已有研究相一致,FⅤ在4℃保存24h后没有显著性改变。可见FⅤ在(4±2)℃保存过程具有相当稳定性。因此当考虑分离血浆时间对不稳定凝血因子的影响时,FⅤ可以先放置一边,而应集中力量考虑另一不稳定FⅧ的活性。 FⅧ是一种不稳定的凝血因子,目前我国临床上无相应的高纯度血液成分FⅧ浓缩物,治疗血友病A、B、血管性血友病、DIC等疾病时,均要用到含有全部凝血因子的FFP。因现有的采血模式限制了血站能把所有献血员的血浆及时转化成FFP保存。因此本研究分析超出8h后(4±2)℃保存条件下CPDA保存液保存的全血分离的普通冰冻血浆的FⅧ活性水平非常重要。结果显示(4±2)℃保存条件下CPDA保存液保存的全血12h时分离的血浆,FⅧ活性水平没有显著性降低;而全血(4±2)℃保存24h时,FⅧ活性水平则有显著性降低,保存24 h时FⅧ活性水平比0h下降达到35%以上。可见,当全血用CPDA