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3种药用植物粗提物的生物活性测定 中毒、残留和导致的环境和生态问题严重危及人类自身和环境安全。植物源杀虫剂,又有人称之为“中草药农药”,由于具有与环境良好的相容性,不污染环境,害虫不易产生抗药性等特点,其研究和开发近年来已成为国内外农药研究领域的一个重要课题。杀虫植物的提取物可以直接应用于防治害虫,或作为模板,研制开发新型的杀虫剂。四川素有“植物王国”之称,中草药植物资源丰富。为了充分利用中草药植物开发植物性杀虫剂,本文初步测试了6种中草药植物的粗提物对菜青虫的杀虫活性,通过对这些植物进行筛选,以期能找到杀虫活性强的植物,为进一步研究与开发新的植物性杀虫剂提供理论依据和应用基础。 1 材料和方法 1.1 全草、蓝桉和构树种的生长特性 问荆(Equisetum arvenseL.)和木贼[Hippochaete hiemale(L.)B?erner]的全草、蓝桉(Eucalyptus globulus Labill.)和构树[Broussonetia papyrifera(L.)Vent]的叶、打破碗花花(Aconitum hupehensis Lem.)的根均采自雅安市雨城区,重楼(Paris polyphylla Smith)的地下块根采自雅安市名山县。 1.2 标准溶液的提取 将采集的植物洗净晾干,在40～50 ℃条件下烘干至材料发脆,用植物粉碎机粉碎后过40目筛。取干粉20 g用滤纸包好放入索氏提取器中,加干粉重10倍量的95%乙醇回流抽提8 h。将提取液过滤后经45 ℃恒温水浴锅上浓缩至20 mL(每毫升含1 g干物质,以1 g DW/mL表示),即得粗提物。试验时供试液浓度为0.1 g DW/mL(将粗提物用水稀释10倍)。 1.3 试验昆虫 从田间选取菜青虫(Pieris rapaeL.)卵多的甘蓝型油菜苗(带土)带回室内,栽于盆中,待幼虫孵化长至3龄时用于试验。 1.4 生物活性的测定 1.4.1 保虫前后面板的处理 采用点滴法。用微量点滴仪点滴植物供试液于3龄幼虫前胸背板,每头2 μL,一种植物供试液为1处理,每处理20头,重复5次。以清水做对照。饲喂新鲜甘蓝叶,逐日观察记载死亡数,并计算校正死亡率。 1.4.2 夹毒叶片的处理 采用夹毒叶片饲喂法。用甘蓝叶做成直径2㎝ 的圆形叶碟,每叶碟均匀涂抹20 μL植物供试液做成夹毒叶片。用夹毒叶片饲喂饥饿12 h的3龄幼虫,一种植物供试液为1处理,每处理20头,重复5次,每12 h更换新鲜的夹毒叶片。以清水做对照。逐日观察记载死亡数,并计算校正死亡率。 1.4.3 叶正反面间的检查 每盆栽种甘蓝型油菜3株,长至7至9叶期时接3龄幼虫20头,6 h后用供试液喷雾处理,喷雾以叶正反面均湿透而液滴不下落为度。一种植物供试液为1处理,每处理为1盆,重复5次。以清水做对照。逐日观察记载死亡数,并计算校正死亡率。校正死亡率按下列公式计算: 校正死亡率(%)=处理组死亡率?对照组死亡率对照组死亡×100(%)=处理组死亡率-对照组死亡率对照组死亡×100 2 植物乙醇粗提物对菜青虫的胃毒作用 各植物供试液处理菜青虫3龄幼虫的杀虫活性见表1。结果表明: 2.1 6种植物乙醇粗提物对菜青虫均有一定的触杀作用。其中,以重楼的粗提物对菜青虫的触杀作用最强,校正死亡率72 h高达78.67%,显著高于其他植物粗提物。其次,蓝桉、打破碗花花、枸树的72 h校正死亡率也都大于50%。 2.2 6种植物乙醇粗提物对菜青虫均有一定的胃毒作用,但校正死亡率都小于60%。其中,以蓝桉的粗提物对菜青虫的胃毒作用较强,校正死亡率在72 h为56.67%,显著高于其他植物粗提物。 2.3 6种植物乙醇粗提物室内防治菜青虫,都有一定的防治效果,且各处理间差异显著。其中,以重楼对菜青虫的防治效果最好,24 h、48 h、72 h校正死亡率都分别显著高于其他植物,校正死亡率高达85.33%。 3 昆虫活性检测 本文仅用菜青虫对6种中草药植物进行了初步筛选,均显示了一定的杀虫活性。其中重楼杀虫活性较高,因此,对于重楼杀虫活性物质的进一步分离、提纯、对昆虫的作用方式和毒理机制等方面还有待更深入的研究。