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红楝抽提部分拒食活性研究 随着人们对高效安全环保农药的高需求，植物源农药的研究和开发已成为农药领域的热点。因为它具有高效、低残留、对动物安全和自然亲和力等优点。植物的生物活性成分主要为其次生代谢物质。目前,人们已从多种植物中分离出许多有生物活性的化合物。其中作为最重要的杀虫植物——楝科植物被广泛研究着。并已从中分离出印楝素(Azadirachtin)、苦楝素(meliacane)、川楝素(toosendanin)等有活性的化合物。 红楝(Toona ciliata)又名红楝子,落叶乔木,木材纹理直花纹美观,质地坚韧,有“中国的桃花心木”之称。主要分布于广西贺县、龙胜、梧州、博白、隆林、田林、乐业等10多个县市,区外云南、贵州、四川、福建、海南等省也有分布。从红楝的种子及树皮中分离出了三萜、柠檬素、香豆素和黄酮类化合物。但这些化合物的生物活性未见进一步报道。本文主要以菜青虫(Pieris rapae)为试虫,对红楝的乙酸乙酯提取物的不同粗分部分的生物活性进行研究。 1 材料和方法 1.1 红废不断采源 试虫从田间直接采集大小一致的4～5龄菜青虫幼虫直接用于试验。 红楝枝叶为2003年10月采自广西永福县寿城,经广西植物研究所分类室刘演副研究员鉴定为楝科植物红楝(Toona ciliata),采后切碎,阴干,60 ℃烘干,备用。 1.2 方法 1.2.1 正己烷、乙酸乙酯残液部分的分离纯化 称取红楝干枝叶2 400 g,用95%工业酒精加热回流2 h,过滤,得到提取液。重复3次,合并提取液。减压回收溶剂得到膏状粗提物1 160 g,加水超声使成水悬液。5 000 r/min离心5 min。取上清液依次用正己烷、乙酸乙酯萃取得到正己烷部分、乙酸乙酯部分和残液部分。取乙酸乙酯部分减压回收溶剂,得到25.2 g膏状物。在硅胶层析柱上展开(展开系统体积比:氯仿∶甲醇=3∶1),根据展开的色带把柱体分为23个部分割下,用甲醇抽滤,减压回收溶剂并用硅胶薄层层析分析(薄层展开系统体积比:氯仿∶甲醇=3∶1),合并斑点相同的部分,最后得到1(3.452 g),2(2.271 g),3(0.244g ),4(1.052 g),5(0.730 g),6(3.343 3 g),7(0.085 g)7个部分。得率分别为0.14%、0.09%、0.01%、0.04%、0.03%、0.14%、0.004%。 1.2.2 部分的拒食活性 采用非选择性叶碟法。以拒食率来评价各部分的拒食活性。拒食率公式如下: 拒食率(%)=(对照组取食量-处理组取食量)÷对照组取食量×100% 1.2.3 乙酰胆碱酯酶活性测定 参考吴文君等(1998)的方法。乙酰胆碱酯酶的比活力以mmol /[min ·μmol(Pr)] 表示。 1.2.4 酶法的测定 参照郭郛等(1988)的方法。 拒食活性测定中样品用丙酮溶样,乙酰胆碱酯酶和蛋白酶测定中则是用水溶样。 2 结果与分析 2.1 最高的活性测定 由结果可知红楝各部分对菜青虫有一定的拒食活性,其中活性最高的是编号为6的部分为60.9%。在继续饲养中出现超龄幼虫,延迟化蛹1～2 d及畸形蛹等发育抑制的表现。 2.2 红草原螯虾幼虾碱酯酶活性测定 如图1(图中样品的浓度为500倍液)所示: 由图1中结果可以看出处理组的乙酰胆碱酯酶活性一直低于对照组。处理组的酶比活力由0.039 7 mmol/(min·μmol)降到0.012 1 mmol/(min·μmol),而对照组却在0.051 5 mmol/(min·μmol)左右摆动。说明红楝对菜青虫的乙酰胆碱酯酶活性有明显的抑制作用,也就是说红楝对菜青虫有较强的神经毒性。这与处理后菜青虫的表现相吻合,处理后菜青虫即表现出摆头,站立不稳,活动减弱并很快进入昏迷状态,对外界刺激无反应。 2.3 蛋白酶活力 蛋白酶活性如图2所示: 从图2中所显示的结果来看,红楝对菜青虫体内的蛋白酶在处理初期(0～12 h)还是能抑制其活性的,但在处理12～24 h后蛋白酶比活力上升并高于对照组,到24～36 h后又下降,但处理48 h后开始恢复正常水平。由测试结果可以推测出,红楝提取物对菜青虫体内蛋白酶的作用比较短暂。 2.4 红髂提取物对菜青虫蛋白质含量的影响 蛋白酶含量如图3所示: 由结果可知,红楝提取物对菜青虫的蛋白质含量有一定影响,但影响不是很大。估计这与红楝提取物对菜青虫蛋白酶活性的作用有关,可能是由于红楝提取物对菜青虫体内蛋白酶活性的影响比较短暂故对菜青虫体内蛋白质含量影响不大。红楝的胃毒毒性不是十分明显,故而其拒食活性不是十分理想,仅为60.9%。 3 红蚤病生物调控植物 (1)目前,国际国内对楝科植物研究甚多,包括研究其化学成分、药用和控制害虫等方面,从该科植物中发现了一些好的杀虫活性成分,