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-聚赖氨酸对常见g-菌的抑菌效果研究

作为一种新型的天然食品洗涤剂，它在人体代谢过程中被分解为氨基酸。它具有光谱抗菌性和高安全性。2003年1月，经f部批准使用。ε-聚赖氨酸是由单一赖氨酸的羧基和ε-氨基通过酰氨键连接成聚氨基酸,内部有疏水性的亚甲基,外部有亲水的羧基和氨基,水中带正电。由于它是一种阳离子聚合多肽,正电荷有利于ε-聚赖氨酸与靶细胞表面带负电的位点结合,阻止细胞内外的物质运输,从而抑制细菌的生长。

ε-聚赖氨酸对酵母、真菌、G+菌和G-菌都有抑制作用,而且对其他天然防腐剂不易抑制的G-的大肠杆菌和沙门氏菌抑菌效果非常好,其对耐热性芽孢杆菌和一些病毒也有抑制作用。

ε-聚赖氨酸价格昂贵,而双乙酸钠和曲酸相对非常便宜。本文以大肠杆菌和沙门氏菌为例,主要研究ε-聚赖氨酸与防腐剂双乙酸钠和曲酸复配使用时的抑菌效果,为扩大其实际应用提供理论依据。

1材料和方法

1.1材料表面

1.1.1病毒

大肠杆菌、沙门氏菌:食品科学与工程学院微生物与酶工程实验室保藏。

1.1.2添加剂的制备

ε-聚赖氨酸(浙江银象生物工程有限公司);双乙酸钠(山东临朐鑫瑞食品添加剂厂);曲酸(成都拉克生物工程公司);牛肉膏、蛋白胨(北京奥博星生物技术责任有限公司)。

1.1.3acl/水胶结合物的制备

牛肉膏蛋白胨:牛肉膏0.3%、蛋白胨1%、NaCl0.5%、琼脂2%、蒸馏水、pH7.4~7.6。

肉汤培养基:牛肉粉0.3%、蛋白胨1%、NaCl0.5%、水、pH7.2±0.2。

1.2测试方法

1.2.1-这种制备聚氨酸母溶液

称取ε-聚赖氨酸粉末0.1000g溶于10ml无菌水中,配制成10000mg/Lε-聚赖氨酸溶液备用。

1.2.2菌种活化及接种

首先将保藏的大肠杆菌和沙门氏菌接种到牛肉膏蛋白胨斜面培养基上,在恒温箱中37℃培养24h进行活化,再将活化后的菌种划线接种到牛肉膏蛋白胨培养基上,使其形成单菌落。分别挑取大肠杆菌和沙门氏菌单菌落一环接种到肉汤培养基中,在37℃下摇床培养4~6h,使菌体生长到对数期,形成菌体数为106~107个/ml的菌悬液,备用。

1.2.3滤纸的制备

用直径10mm的打孔器将滤纸打孔制成圆滤纸片备用。

1.2.4抑菌圈的制备

将圆滤纸片浸入350mg/L、300mg/L、250mg/L、200mg/L、150mg/L和100mg/L的ε-聚赖氨酸溶液中,取出烘干,并在紫外线下灭菌15min后备用。

然后分别取0.1ml菌悬液于牛肉膏蛋白胨平板上,用灭菌棉棒涂布均匀,待菌液被完全吸收后,将不同浓度圆滤纸片贴于平板上,置于37℃培养24h,观察抑菌圈的生成情况,用游标卡尺测量抑菌圈直径,记录结果。每个梯度做3个平行(以下同)。

1.2.5空白对照试验

将ε-聚赖氨酸母液稀释浓度至350mg/L、300mg/L、250mg/L、200mg/L、150mg/L和100mg/L,分别取上述溶液10ml与1ml0.1%的双乙酸钠溶液混合。以无菌水与0.1%双乙酸钠混合做空白对照。测量抑菌圈直径,并与ε-聚赖氨酸单独使用的抑菌效果做比较。

1.2.6.曲酸溶液的配制

将上述不同浓度ε-聚赖氨酸母液稀释液各10ml与1ml0.2%的曲酸溶液混合。以无菌水代替ε-聚赖氨酸做空白对照。测量抑菌圈直径并进行抑菌效果比较。

1.3统计分析

各数据均取相同浓度平行试验均值进行比较,并分别进行标准偏差分析。

2结果与分析

2.1抑菌抑菌效果

由附表可以看出,ε-聚赖氨酸对于大肠杆菌、沙门氏菌均能起到抑菌作用,且随着ε-聚赖氨酸浓度的增大抑菌效果逐渐增强。ε-聚赖氨酸对沙门氏菌抑菌效果要好于大肠杆菌。

2.2-聚赖氨酸双乙酸钠复合液对大肠杆菌抑菌效果的影响

由图1可以看出0.1%双乙酸钠单独使用时对大肠杆菌抑制效果不明显,没有形成抑菌圈。

由图2可以看出,与同浓度的ε-聚赖氨酸单独使用时相比,除了200mg/Lε-聚赖氨酸双乙酸钠复合液对大肠杆菌抑制作用效果有所降低外,其他浓度的复合试剂所形成抑菌圈都有所增大,但协同增效作用不十分显著。

由图3和图4可以看出不同浓度ε-聚赖氨酸与0.1%双乙酸钠复合使用对大肠杆菌和沙门氏菌均有一定的抑制作用,且对沙门氏菌的抑制效果好于大肠杆菌,但对两种菌株协同增效作用都不是特别明显。

2.3复配试验浓度

0.2%~0.4%的曲酸对细菌具有良好的抑菌效果,曲酸对大肠杆菌等肠道菌最低抑菌浓度是0.2%。因此选用0.2%曲酸作为复配试验浓度。

由图5可以看出,ε-聚赖氨酸与0.2%曲酸复合时,随着ε-聚赖氨酸浓度的增大抑菌圈逐渐增大,即抑菌作用逐渐增强。当ε-聚赖氨酸浓度在100~250mg/L时对大肠杆菌的协同增效作用较显著,但随着浓度的加大,协同作用趋缓。

由