腺病毒的扩增及纯化.docxVIP

重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作（细菌内同源重组AdEasySystem）

CloningGene

ofInterest

Homologous

Recombinaticn

invivoinBacteria

I

iM尊

,iPr=i.

D布物#vrilli#5I

Rogians0HcmclogoiRccQoibin-Rti

曲『。由中rm

U51B3=11%s?l?clfs—Kan[

Ftecoinbinunt

Ad

Plasmid

pAdtasy-1

Vector

Erawp-iidotian

Enccpidkrlionisignal

IrnHit-fKl4DW(arHEK293||eaIIi

VirusProductioninAD-293Cells

目的基因的克隆（以pshuttle-CMV

选择适当酶切位点，进行酶切连接，将目的片段插入pshuttl-CMV质粒多克隆位点。

重组质粒鉴定：酶切鉴定或测序。

重组质粒扩增，纯化并准备适量含目的基因的穿梭质粒。

用PmeI单酶切线性化重组穿梭质粒，电泳鉴定质粒完全被切开。

胶回收线性化质粒，以备共转化使用。

二共转化

大肠杆菌BJ5183电转感受态制备

从新鲜琼脂板上挑取单个BJ5183细菌，接种于LB培养基中，37°C振摇过夜。

接种25ml过夜培养物于50