蛋白质电泳试剂配制.docxVIP

1蛋白质电泳试剂配制

2MTris-HCl(pH=8.8)100ml

称24.2gTris-base加50mlddH2O,加浓HCl至pH=8.8(约4ml),加ddH2O定容至100ml。

1MTris-HCl(pH=6.8)100ml

称12.1gTris-base加50mlddH2O,加浓HCl至pH=6.8(约8ml),加ddH2O定容至100ml。

10%(W/V)SDS100ml

称SDS10g，加ddH2O定容至100ml。

50%(V/V)甘油100ml

量取50ml100%甘油，加ddH2O定容至100ml。

4X分离胶缓冲液100ml(B液)

75ml2MTris-HCl(pH=8.8)1.5M

4ml10%SDS 0.4%

21mlddH2O

4°C保存

4X堆积胶缓冲液100ml(C液)

50ml1MTris-HCl(pH=6.8)0.5M

4ml10%SDS 0.4%

46mlddH2O

4C保存

丙烯酰胺储存液100ml(A液)

30%(W/V)丙烯酰胺29.2g

0.8%甲叉双丙烯酰胺0.8g

加ddH2O40ml缓慢搅拌至粉末完全溶解，定容至100ml，过滤，4C保存。

8）5X样品缓冲液10ml

600ul

1MTris-HCl(pH=6.8)

60mM

5ml

50%甘油

25%

2ml

10%SDS

2%

500ul

2-巯基乙醇（DTT）

14.4mM

1ml

10%漠酚兰

900ul

ddHO

4C保存

9）10%过硫酸铵（APS）

称0.1294gddH2O溶解，

-20C保存。

10）5X电泳缓冲液

Tris-base15g

25mM

(1X)

甘氨酸94g

192mM

(1X)

SDS 5g

0.1%

(1X)

加ddH2O至1L，pH=8.3左右，室温长期保存。

11）考马斯亮兰染色液

考马斯亮兰 R-250

1.0g

甲醇

450ml

HAc

450ml

ddH2O

定容过滤，室温保存。

100ml

12） 1%（W/V）漠酚兰25ml

称250.3mg漠酚兰，加ddH2O至25ml，搅拌至完全溶解，过滤除去未聚合的燃料。

13） 考马斯亮兰脱色液500ml

甲醇50ml

冰醋酸50ml

ddH2O400ml

室温保存。

2蛋白质定量溶剂

14） BSA1mg/ml3ml

称取3mg用ddH2O溶解。

15） 稀释染色液250ml

浓染色液50ml

ddH2O 220ml

过滤后棕色瓶4C保存

16） 实验用缓冲液Tris-HCl50mM（pH=8.0）

2MTris-HCl（pH=8.8）1.25ml,稀释到50ml

3蛋白质样品的定量

1） 准备染色剂

将ddH2O与Biorod按4：1稀释染色剂过滤，除去粉状物，棕色瓶4C保存（有毒）。

2） 准备8份蛋白质标准样品比色管

3） 吸取标准样品（终体积为100ul）分别加入干净干燥的比色管。

4蛋白质电泳

1） 分离胶10ml（8%适合分离范围30-120KDa

A液2.7ml

B液2.5ml

ddH2O4.8ml

10%Aps50ul

TEMED5ul

灌注2块胶块，每个注入3.4ml水封，凝50min以上（37C约30min），水浅分层后倾斜凝胶板，用滤纸吸尽水层（滤纸不要接触到胶层）。

2） 分离胶10ml（12%适合分离范围15-60KDa）

A液4ml

B液2.5ml

ddH2O3.5ml

10%Aps50ul

TEMED5ul

分离胶4C下可储存1周。

3） 堆积胶（5%）4ml

A液0.67ml

C液1ml

ddH2O2.3ml

10%Aps50ul

TEMED5ul

灌注2块胶块，每个注入1.3ml水封，凝30min以上（37C约18min）。