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基于代谢组学的蟾酥对大鼠急性毒性研究

灿松是一个由青蛙科动物采用的白浆过渡和干燥而成的固体。它的化学成分非常复杂，包括各种青蛙素化合物，主要包括：青蛙素的化合物，如脂肪毒的前基、华灿毒的前基、青蛙灵、青蛙素灵、远华素林、奇螳螂素等，其基本结构与强心剂相似。烷基胺类化合物；青蛙素酸盐含有青蛙素，不仅是一种评价甘薯的有效成分，也是其毒性成分。如果你长期或过度服用，你会出现呕吐、呼吸困难、肌肉痉挛和神经系统损伤等症状。青蛙素和重组素主要用于心脏的自我征服或末端，直接影响心脏，导致心率缓慢。焦虑、心率和心率的偏离缓慢，从而影响房内传输，最终导致收缩。烷基化合物具有错觉效应。虽然人们对青蛙的毒性认识较早，但目前的研究主要集中在对青蛙的分析和药理作用上，但对青蛙的毒性作用机制尚不清楚。近年来，由于反映毒性信息在生物代谢过程中得到广泛体现，代谢组学在阐明毒性代谢中的应用，形成了一个新的学科分支。当毒性物质与细胞或组织相互作用时，改变主要细胞代谢中内源性物质的比例和浓度，这些变化最终反映在溶液组成的变化上。在这项工作中，我们使用了一种新的方法来模拟器官中的不同部位，并使用了评价不同化合物的最佳二乘法筛选方法。对不同配合物的处理和不同配合物的提取进行了验证，并将不同分子量的提取与不同分子量的提取进行了比较。

1实验部分

1.1谱仪.浚酥

上海奥尔科特生物科技有限公司MPA多道生物信号分析系统;美国WatersAcquityUPLC超高效液相色谱仪;美国WatersLCTPremierXE质谱仪.

蟾酥由上海和黄药业公司提供;乙腈(LC/MS级,美国Baker化学品公司);甲醇(HPLC级,德国Merck公司);甲酸(瑞典Fluka公司);花生四烯酸(C20∶4)、亚油酸(C18∶2)、油酸(C18∶1)、Lyso-PC(溶血磷脂酰胆碱,C18∶0)、Lyso-PC(C18∶2)、Lyso-PC(C18∶1)及Lyso-PC(C16∶0)均购自Sigma-Aldrich公司.超纯水(18.2MΩ)使用Milli-Q超纯水系统(法国Millipore公司)制备.

1.2不同给药剂量和心电时测定大鼠心率时降低给药速率是临床组

实验动物采用成年SD大鼠,体重180~210g,购自军事医学科学院实验动物中心.自由摄取饲料,饮水瓶自由摄取自来水.饲养2d后,将40只大鼠随机分为5组,每组8只,雌雄各半.5组动物分别给予蟾酥128,64,32及16mg/kg以及生理盐水.给药前禁食不禁水12h,按给药量以1%羟甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液配制成相应浓度的混悬液,给药前摇匀,按照不同浓度等体积灌胃给药,蟾酥的最低给药剂量经临床剂量换算得到.给药2h后,取肝门静脉血,血样取出后置于室温,凝固后于4℃以3500r/min离心10min,分离得到上层血清,-20℃下保存.UPLC/TOF-MS分析前,将血清冻融后取100μL置于2mLPV管中,加入400μL甲醇,涡旋2min,4℃下以12000r/min离心15min,取上清液,用甲醇稀释2倍后过0.22μm滤膜(法国Millipore公司),置于Waters标配进样小瓶中待测.心电测量时间分别为给药前和给药后0.5,1.0,1.5和2.0h.每次测量时间为心率稳定后2~3min.从每只大鼠的心电图中选取较为稳定的30s进行分析,对选定时间内的数据进行平均化,计算得到大鼠每次给药后的心率.再对同组同一给药时间的数据计算心率平均值.

1.3流动相组成、洗脱样品的制备

色谱分离采用AcquityTM-BEHC18反向分析柱(100mm×2.1mmi.d.,1.7μm,美国Waters公司),柱温50℃,流速0.4mL/min.自动进样器温度设定为4℃,每次进样4μL.流动相组成为0.1%甲酸水溶液(A)和纯乙腈(B),采用梯度洗脱方式洗脱样品:0~3min,体积分数5%~50%B;3~20min,50%~95%B;20~22min,95%~95%B;22~23min,95%~5%B;23~25min,5%~5%B.

质谱分析采用“W-”模式,检测参数设置:脱溶剂气流量750L/h,脱溶剂气温度350℃,锥孔气流量40L/h,离子源温度120℃,毛细管电压2500V,锥孔电压50V,微通道板电压2300V.质谱图平均扫描速率0.1s,锁定质量校准选择“DRE”模式,以亮氨酸-脑啡肽进行实时精确质量校正(m/z:554.2615[M-H]-)作为质量