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牛催乳素释放因子(PRF)酶联免疫分析

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T

7.0ng/L-240ng/L

使用目的：

本试剂盒用于测定牛血清、血浆及相关液体样本中催乳素释放因子(PRF)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛催乳素释放因子(PRF)水平。用纯化的牛催乳

素释放因子(PRF)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入催乳素释

放因子(PRF)，再与HRP标记的催乳素释放因子(PRF)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体

复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸

的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的催乳素释放因子(PRF)呈正相关。用酶

标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛催乳素释放因子(PRF)

浓度。

试剂盒组成

130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶

2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（480ng/L）0.5ml×1瓶

3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶

4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份

5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张

6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀

释。

240ng/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

120ng/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

60ng/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

30ng/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

15ng/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液

40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底

部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此

重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10

分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止

液后15分钟以内进行。