生物化学实验教学大纲.docVIP

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生物化学实验教学大纲

制定本大纲的依据

根据2006级海洋科学专业(海洋生物方向)培养计划和海洋生物化学课程教学大纲制定本实验教学大纲。

二、本实验课程的具体安排

实验项目的设置及学时分配

序号

实验项目名称

内容简介

实验学时

实验要求

实验类型

实验类别

每组人数

1

还原糖和总糖的测定(3,5-二硝基水杨酸法)

掌握3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖和总糖的定量方法

4

必修

验证

专业

2

2

氨基酸的分离鉴定—纸层析法

了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法

4

必修

验证

专业

2

3

蛋白质的提取

掌握细胞破碎,蛋白质的提取的基本操作

4

必修

验证

专业

2

4

蛋白质含量的测定

掌握蛋白质含量测定的几种方法

4

必修

验证

专业

2

5

凝胶层析法分离纯化蛋白质

了解凝胶层析的基本原理,并学会用凝胶层析分离纯化蛋白质

8

必修

综合

专业

4

6

过氧化物酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳

使学生掌握聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳的原理和操作技术

8

必修

综合

专业

4

7

海藻脂肪酸的提取

掌握索氏抽提法提取的原理和方法

4

必修

验证

专业

4

8

海藻DNA的提取

学习从新鲜的海藻中提取总DNA的方法

4

必修

验证

专业

2

9

酵母核糖核酸的分离及组分鉴定

了解核酸的组分,并掌握鉴定核酸组分的方法

4

必修

验证

专业

2

10

淀粉酶活性的测定

掌握分别测定两种淀粉酶的方法

4

必修

验证

专业

2

备注:实验要求:填必修、选修。实验类型:填演示、验证、综合、设计。实验类别:基础、专业等

本实验课在该课程体系中的地位与作用

生物化学是在分子水平上利用化学原理阐明生命现象的科学,是海洋科学专业重要的基础课,海洋生物化学理论和技术有着广泛的实用价值,对海洋生物学科的发展起着促进作用。

生化实验课一方面使学生在实验中验证理论的来源与正确性、加深对理论的理解;另一方面,生物化学实验手段又是生命科学发展的必用手段,生化实验课对于培养学生科研能力和素质非常重要而且必要。

学生应达到的实验能力与标准

1.熟练掌握以下各项生物化学实验的基本操作技能:

各种常用玻璃仪器的洗涤和使用。滴管、吸量管、微量加样器的使用。

离心机、分光光度计、紫外检测仪、酸度计、层析系统、自动收集器、电泳仪系统等的使用。

各种试剂的配制。

2.掌握以下各项生化实验基本技术和基本原理

还原糖和总糖的测定方法

掌握蛋白质含量测定的几种方法

蛋白提纯:细胞破碎盐析法

分离纯化蛋白质的方法

蛋白质电泳技术

几种海洋生物活性物质的提取与测定。

测定两种淀粉酶的方法

讲授实验的基本理论与实验技术知识:

实验一还原糖和总糖的测定(3,5-二硝基水杨酸法)

实验基本内容

用酸将没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖,再利用还原糖的性质进行测定,这样可分别求出总糖和还原糖的含量。分别进行葡萄糖标准曲线的绘制;还原糖的提取与测定;

总糖的提取、水解和测定。

二、实验基本要求

掌握总糖和还原糖的测定

三、实验仪器及耗材

分光光度计

水浴锅

玻璃仪器

恩酮试剂

标准葡萄糖溶液

实验二氨基酸的分离鉴定--纸层析法

一、实验基本内容

样品中各种氨基酸的分配系数不同,不同氨基酸随流动相移动的速率就不同,于是就将这些氨基酸分离开来,形成距原点距离不等的原点。

二、实验基本要求

了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法

三、实验仪器及耗材

1、混合氨基酸溶液

2、滤纸

3、层析缸

4、分光光度计

5、溶剂系统

6、显色贮备液

实验三蛋白质的提取

实验基本内容

不同蛋白质的大小、溶解度、电荷等性质不同可以根据性质不同来分离蛋白质。首先进行细胞破碎,下一步进行离心,进而硫酸铵盐析,最后检测。

二、实验基本要求

掌握细胞破碎方法,掌握盐析中的影响因素。

三、实验器材及耗材

离心机

组织捣碎机

硫酸铵

醋酸铵缓冲液

实验四考马斯亮蓝法测定蛋白质含量

一、实验基本内容

考马斯亮蓝G-250染料在酸性溶液中与蛋白质结合,溶液的颜色由棕黑转为蓝色,595nm比色,做出标准曲线。在一定的蛋白浓度范围内,A595与蛋白浓度成正比,制备标准曲线。结果计算分析。

二、实验基本要求

考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的实验操作,此方法的优点和局限性。

三、实验仪器及试剂

1、容量瓶

2、723分光光度计

3、试管

4、混合器

5、考马斯亮蓝G-250

6、BSA

7、95%乙醇

8、85%磷酸仪器:

实验五凝胶层析法分离纯化蛋白质

一、实验基本内容

蛋白质分子量不同,洗脱速率不同,根据洗脱速率的不同,达到分离蛋白质的目的。

首先凝胶的处理,样品分离,结果测定与分析。

二、实验基本要求

了解凝胶层析的基本原理,并学会凝胶层析分离过程的实验操作要点,达到纯化蛋白质的目的。

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