脱无机硫菌种的筛选及鉴定.docx

脱 无 机 硫 菌 种 的 筛 选 及 鉴 定

固体9K培养基：在上述培养基中加入1%～2％水洗琼脂．

7.2实验方法及步骤

7.2.1培养基成分及配制

9K培养基的配制方法：按配方比例依次准确地称取药品，将所称药品（除硫酸亚铁外）放入烧杯中，加水搅匀，加热使其溶解。待完全溶解后，冷却，用硫酸调pH值为2，用蒸熘水注容。高压蒸汽l21°C灭菌.!Omin，同时在紫外灯下照射硫酸亚铁30min灭菌。灭菌后将硫酸亚铁加入培养基中。

固体9K培养基的配制方法：在培养基中加入12％经紫外灭菌30min后的琼脂．

7.2.2富集培养

实验方法：用移液眢移取SmL经无菌水稀释的样品液体上消液，放入含有约1.!0mL培养基的250mL的锥形瓶中，使用封口膜封闭瓶口，作好标记，千3?oc,ISOr/min条件下摇床中恒温培养，培养7~9d, 待培养液中有混浊后，便得到增殖菌液。

7.2.3菌株的分离纯化

将9K固体培养基B千l21°C高温灭菌.!Omin,然后在无菌净化工作台上千无菌的条件下倾倒平板约平板的1/3~.l/3,静置至培养基淉固。用接种环在无菌条件下挑取少许增殖培养液千平板上划线，3o?c培养7~9d,观察细菌生长情况，经多次划线分离，直接得到单菌落。分离出的单菌落特征一致，并且革兰氏染色后显微观察到的菌体形态、大小、革兰氏阴性和阳性一致，方可认为纯菌落，选择每份样品中生长情况最好的纯菌落编号，作好标记，全部保藏千4?c冰箱中。

7.2.4菌株的初筛

将分离得到的菌种在无菌的条件下接种千含有约1.!0mL培养基的250mL锥形瓶中，在30°C, ISOr/min的条件下进行恒溫培养3~5d,备用。

在培养基中加入5％的灭菌后的高硫煤，在灭菌后的该发酵液中加入10％的菌液，作好标记，培养7~9d。待培养完成后，用无菌接种环将该细菌在无菌的固体培养基上划线，作好标记。将接种的平板倒置千恒溫培养箱中，3o?c条件下恒溫培养。待平板上形成菌落后，再培养1~.ld, 然后在无菌操作台上进行无菌接种。

每种细菌只选一个生长旺盛的菌株，用接种环将该细菌接种千含有固体培养基的斜而上或液体培养基中，作好标记。将斜而或液体培养基移入恒溫培养箱或摇床中3?oc条件下培养1~.ld,待斜而生长出细菌后，将斜而移入冰箱中4?c保存。

7.2.5菌株的复筛

取煤样!Og加入到IOOmL菌液中，调整pH值到.1.0, 在3o?c、ISOr/min条件下进行恒溫摇床恒溫培养.!Od, 每隔一天取样，测定煤中硫含呈．

7.2.6菌种鉴定

选择脱硫效率最好的菌种，通过观察菌体菌落形态特征，检测生长特性和生理生化特征，对所选菌种进行初步鉴注。具体方法见第四章。

7.3结果与讨论

7.3.1分离纯化的结果

样品经平板划线分离得到DTT（大同煤矿上样）DTS（大同煤矿矿井水样）HFS

（化肥厂水样）DST（东升庙硫铁矿上样）DSS（东升庙硫铁矿矿井水样）TYS（炭窑口硫铁矿矿井水样）HSYT（五大连池火山口石样）7株纯菌落。

732初筛的脱硫菌株

经初筛发现纯化得到DTT（大同煤矿上样）DTS（大同煤矿矿井水样）HFS（化肥厂水样）DST（东升庙硫铁矿上样）DSS（东升庙硫铁矿矿井水样）TYS（炭窑口硫铁矿矿井水样）HSYT（五大连池火山口石样）7株纯菌可以在筛选培养基中生长。

733复筛的脱硫菌株

7种菌作用后煤样中的硫铁矿硫含垂见表7-l，由表可得到DTT（大同煤矿上样）菌株具有较好的脱硫效果，因此选用该菌株作为后续实验菌种。

表7-1浏定结果

Table7-1Theresultofmeas田anent

时间

d

DTT

DTS

HFS

DST

DSS

TYS

HSYT

空白

1

103

IO3

103

104

102

IO3

104

IO2

3

IOl

IO3

IO2

IO3

IOO

IOl

IO3

IO3

5

085

096

092

096

086

IOO

092

104

7

0.88

083

078

094

072

085

094

IO3

9

076

076

067

086

066

0.70

086

IO2

11

061

0.71

055

085

066