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一株分离自母乳的长双歧杆菌婴儿亚种YLGB-1496的菌株鉴定

摘要以母乳来源的长双歧杆菌婴儿亚种YLGB-1496为研究对象,收集5株不同批次的YLGB-1496作为目

标菌株,收集8株长双歧杆菌参比菌株实物,同时收集28株长双歧杆菌婴儿亚种全基因组序列。采用形态学、

生理生化、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定技术和全基因组测序技术,建立了适用于YLGB-1496的菌

T

株鉴定方法。结果表明,5株YLGB-1496与模式菌株B.longumsubsp.infantisATCC15697的平均核苷酸一致性

值均大于98%,数字DNA-DNA杂交值均大于85%,5株不同批次来源YLGB-1496鉴定为长双歧杆菌婴儿亚种。

对YLGB-1496和参比菌株的1059个共有核心基因开展多位点序列分型分析,结果表明该菌株可与其他参比菌

株有效区分。以菌株YLGB-1496-1的基因组序列为参考开展单核苷酸位点多态性分析,结果表明YLGB-1496

不同来源菌株间SNP差异小于30,并且与其他参比菌株差异大于18000,系统发育分析可以有效区分YLGB-

1496与其他参比菌株。益生菌的安全性和功能性评价均在菌株水平具有特异性,研究建立的表型、基因型相结

合的菌株鉴定方法可为菌株鉴定标准提供有效技术支撑,对促进益生菌在食品行业更加安全和广泛的应用具有

重要意义。

关键词长双歧杆菌婴儿亚种;菌株鉴定;全基因组测序;多位点序列分型;单核苷酸位点多态性

长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum)作为人体肠研究表明益生菌的功能性和安全性特征在菌株

道中常见的定植细菌,也是婴幼儿肠道菌群中最丰富水平具有特异性,在株水平间具有较大差异[7-8]。国

[1]

的物种之一,对人类健康发挥着重要作用。随着内外政府监管机构及标准组织也对益生菌在菌株水

分类学技术的发展,B.longum的分类学地位变迁为平的鉴定和特征分析提出更高要求[9-10]。随着微生

4个亚种,分别为B.longumsubsp.longum,B.longum物鉴定技术和系统分类学的发展,菌株水平鉴定技术

subsp.infantis,B.longumsubsp.suis和B.longumsub-也持续动态更新,益生菌“种水平”分类学地位是“株

[2][10]

sp.suillum,其中B.longumsubsp.infantis与婴幼儿水平”鉴定的必要前提。菌种分类学地位的确认

肠道健康密切相关,通过加速免疫系统成熟、平衡免通常可通过形态学、生理生化特征、基质辅助激光解

疫系统、抑制炎症、改善肠道屏障功能、增加乙酸生成析电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaserdesorption/

[3]

等方式对宿主有益。目前B.longumsubsp.infantisionizationtime-of-flightmassspectrometry,MALDI-TOF

已列入我国《可用于食品菌种名单》和欧盟安全资格MS)等表型鉴定技术,并结合分子生物学16SrDNA

认定(qualifiedpresumptionofsafety,QPS)名单中,已和持家基因鉴定、平均核苷酸一致性(averagenucleo-