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免疫组化步骤
多聚甲醛灌流取材，多聚甲醛后固定，30%多聚糖溶液沉糖；
冰冻切片(1d-14d脊髓=20mm;14d-28d=10nm;DRGd=10nm)
0.01MPBS洗10minx3次；
1NHCL暴露抗原30min;
去离子水洗，0.01MPBST洗10minx3次；
3%双氧水（0.01MPBS配制）洗10min,灭活内源性HRP;
0.01MPBST洗10minx3次；
5%-10%血清封闭30min（0.01MPBST配制）；
—抗过夜，一抗用PBST稀释；
0.01MPBS洗10minx3次，二抗3孵育小时；
0.01MPBS洗10minx3次，HRP-亲和素3小时；
0.01MPBS洗10minx3次，DAB显色12T8min。
免疫组化常用试剂配制
0.1MPB:14.5gNa2HPO4?12H2O
500mLHO2
1.5gNaH2PO4?2H2O
0?1MPBS:500mL0.1MPB
45gNaCl
0.01MPBST:100mL0.01MPBS10滴TritonX-1004.INHCL:盐酸：水=1:10
5.4%多聚甲醛:
13.6gKHPO
2 4
3.6gNaOH40g多聚甲醛
精心整理
1000mLHO
2
注：1).需要60°C加热溶解，过滤使用；
.多聚甲醛每次比需要多称10g，以弥补后面过滤的损失；
.现将多聚甲醛溶于1000mL水中，然后一边加热搅拌一边缓慢加入多聚甲醛的助
溶剂NaOH，待NaOH和多聚甲醛都完全溶解后再加入KH2PO4，溶后过滤备用。
6.DAB液：以0..1MPB配制，DAB浓度0.05%，H2O2浓度0.03%。
注：1).h2O2临用时再加；
2).用DAB染后用0.01MPB洗。
7.30%蔗糖：150g蔗糖
500mL4%多聚甲醛
注：可同时沉糖后固定。
8.封闭液：10%山羊血清(做免疫荧光时另加0.1%BSA)。
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