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PE38基因真核表达载体构建及体外抗HCC作用研究的开题报告

1.研究背景

肝癌是全球范围内第6大常见恶性肿瘤，因其易转移且对治疗反应不佳而臭名昭著。PE38是一种噬菌体蛋白A转移酶，能够将噬菌素双亲端的糖化CD25配体和肿瘤血管生成抗原抵达癌细胞。PE38已被广泛用于癌症治疗领域，但其在临床应用中存在潜在的毒副作用。因此，研究PE38基因真核表达载体并研究其体外抗HCC作用，将有助于进一步探讨PE38的治疗应用及其安全性。

2.研究目的

本研究旨在构建PE38基因真核表达载体并研究其对肝癌细胞的体外抗癌作用及对正常细胞的毒副作用。

3.研究方法

（1）基因克隆：将PE38基因从质粒中PCR扩增得到目的基因片段，设计primers和载体，通过限制性酶切和连接，将目的基因片段与pEGFP-N1载体连接，并转染到E.coli中，筛选正向克隆。

（2）载体构建：将PE38基因克隆入真核表达载体pCDNA3.1(+)-HA-GFP中，通过限制性酶切和连接，构建PE38基因真核表达载体。

（3）细胞培养：选用人肝癌细胞株Hep3B和正常肝细胞L02进行体外实验，细胞存活情况通过MTT法检测，病毒的感染效果通过荧光显微镜观察。

（4）Westernblot：采用Westernblot检测细胞中PE38与蛋白质合成的水平。

4.预期结果

（1）成功构建PE38基因真核表达载体。

（2）PE38基因真核表达载体可有效杀灭肝癌细胞，对正常细胞的毒副作用较小。

（3）针对PE38的特异性抗体将得到成功生产，可以用于Westernblot实验。

5.意义及价值

本研究可为PE38的治疗应用探讨提供实验基础。此外，PE38与蛋白质合成有关，因此本研究可进一步探究其对蛋白质合成的影响，为研究肝癌生长机制提供新思路。