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GB/T23527.4—XXXX

附录A

（资料性）

固定化葡萄糖异构酶活力的测定

A.1范围

本方法适用于测定固定化葡萄糖异构酶样品的活力。

A.2原理和反应条件

A.2.1原理

利用葡萄糖异构酶可以将葡萄糖转化为果糖的原理，把酶装填在柱子中并在标准条件下与葡萄糖浆反

应。用旋光仪检测由葡萄糖转化来的果糖，从转化速率计算酶的活力。

A.2.2反应条件

葡萄糖：450g/kg。

底物：pH7.5。

温度：60℃。

2+

Mg：99mg/L（1.0g/L七水合硫酸镁）。

2+

Ca：2μg/g。

激活因子，SO：100μg/g（0.18g/L焦亚硫酸钠）。

2

转化率：0.40~0.45。

碳酸钠缓冲液：2mmol/L。

A.3缩略语

下列缩略语适用于本附录

IGIU；immobilizedglucoseisomeraseunits，葡萄糖异构酶的活力单位。

A.4专一性和灵敏度

本方法的定量限为160IGIU/g。

注：IGIU表示在标准条件下每分钟转化1μmol葡萄糖所需的酶量。

A.5仪器和设备

A.5.1恒温水浴：精度±0.2℃。

A.5.22.5cm×20cm玻璃柱。

A.5.3变速蠕动泵。

A.5.4折光仪。

A.5.5自动进样器

A.6试剂

本方法中所用的水，在未注明其他要求时，应符合GB/T6682-2008中水的规格，所用试剂，在未注明

其他规格时，均指分析纯。分析中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其

他要求时，均按GB/T601、GB/T602和GB/T603的规定制备

A.6.1硫酸镁储备液（226g/L）

称取七水合硫酸镁463.0g，用水溶解并定容到1000mL。

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A.6.2硫酸镁工作液（0.226g/L）

取上述溶液1.0mL，用水定容到1000mL，现配现用。

A.6.3氢氧化钠溶液1（40g/L）

取氢氧化钠40.0g，用水溶解并定容到1000mL。

A.6.4氢氧化钠溶液2（160g/L）

取氢氧化钠160.0g，用水溶解并定容到1000mL

A.6.5碳酸钠溶液（105.99g/L）

取碳酸钠105.99g，用水溶解并定容到1000mL。

A.6.6硫酸溶液

取浓硫酸27.2mL，在搅拌条件下缓慢倒人一定量的水中，待冷却到室温后用水定容到1000mL。

A.6.7葡萄糖底物（450g/kg，pH7.5）

分别称取539.0g无水葡萄糖，1.0g七水合硫酸镁、0.21g碳酸钠和0.18g焦亚硫酸钠，在加热（最高

70℃）和搅拌下完全溶于700mL去离子水中。冷却到25℃，用0.5mol/硫酸溶液（A.6.6）调节pH到

7.50士0.03，然后用去离子水定容至1000mL或定重到1199g。

然后分别取87.0mL硫酸镁储备液（A.6.1），80.0mL碳酸钠溶液（A.6.5），7.12g焦亚硫酸钠和约

28.5mL硫酸溶液（A.6.6）到上述定容的葡萄糖底物中，搅拌均匀。检查溶液的pH，如需要，用氢氧化钠

溶液2（A.6.4）或硫酸溶液（A.6.6）调节到7.50±0.03。

A.7标准对照品

如可能，在每次试验中应加一个标准对照品，以检查测定的稳定性。如标准对照品的检测值与标志值

超过精密度所规定的范围，需要重新进行试验。

A.8试验步骤

分析试验持续3天。其中第一天主要用来安装设备和酶样品的填柱处理，第二天用来进行预试验，第

三天用来正式测定样品的活力。