泛素连接酶UBE2E2调控心肌细胞铁死亡参与实验性自身免疫性心肌炎的发病机制研究.pdf

摘要

摘要

研究背景及目的：

心肌炎是一种严重且可能危及生命的疾病，它会导致扩张型心肌病（Dilated

cardiomyopathy,DCM）、严重的心力衰竭（HeartFailure,HF）和心源性猝死，

临床工作中迫切需要有效的治疗药物。心肌炎的特征是心脏内的复杂炎症反应，

病毒感染作为常见病因会引发心脏特异性自身免疫反应，导致自身免疫性心肌

炎(Autoimmunemyocarditis,AM)。临床上约21%的急性心肌炎患者会发展为

DCM，持续的心肌免疫损伤是DCM发生发展的关键要素，免疫损伤机制的阐

明并阻断其进展具有重要的临床价值。AM的发病机制非常复杂，目前仍未完全

阐明其发病机制，临床上没有形成统一有效的治疗方案。

已有研究提示铁死亡参与调控心肌梗死、心力衰竭、心肌缺血再灌注、心

肌纤维化的病理过程，铁死亡是否参与AM的发病过程，尚未见文献报道。

既往研究提示泛素-蛋白酶体系统可参与调控胰腺癌、缺血再灌注、肿瘤干

细胞的铁死亡过程。泛素连接酶E2E2（Ubiquitin-conjugatingenzyme

E2E2,UBE2E2）作为泛素-蛋白酶体系统家族的一员，是否参与调控AM的铁死

亡水平，尚未见文献报道。

本研究将通过构建实验性自身免疫性心肌炎（Experimentalautoimmune

myocarditis,EAM）体内外模型，揭示AM是否存在铁死亡现象以及UBE2E2是

否参与调控AM的铁死亡水平，探究UBE2E2调控铁死亡改善AM心肌损伤的

分子机制，为临床治疗AM提供潜在的靶点。

材料与方法：

一、UBE2E2、铁死亡在EAM体内外模型中的作用

1、体内实验

（1）采用猪心肌肌球蛋白构建EAM体内模型，将Balb/c小鼠随机分为模

型组（n=8）、对照组（n=8）。

（2）心脏苏木素-伊红染色（Hematoxylin-eosin,HE）评估心肌损害情况。

（3）实时荧光定量PCR（Real-timequantitativePCR,qRT-PCR）检测

UBE2E2在EAM模型小鼠心肌组织中的信使核糖核酸（Messengerribonucleic

II

摘要

acid，mRNA）的表达，检测心肌组织中铁死亡相关标记物的mRNA表达，如谷

胱甘肽过氧化物酶4（Glutathioneperoxidase4,GPX4）、酰基辅酶A合成酶长链

家族成员4（Acyl-CoAsynthetaselong-chainfamilymember4,ACSL4）、铁蛋白

重链1（Ferritinheavychain,FTH1）、环氧化酶2（Cyclooxygenases-2,COX2）。

（4）蛋白免疫印迹试验（Westernblot）检测心肌组织中UBE2E2的蛋白表

达，检测心肌组织中铁死亡相关标记物如GPX4、FTH1、COX2、ACSL4的蛋

白表达。

（5）酶联免疫吸附试验（Enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）检测

小鼠血清中的炎性因子如肿瘤坏死因子α（Tumornecrosisfact,TNF-α）、白介素

1β（Interleukin-1β,IL-1β）的水平以及心肌组织中亚铁离子水平。

2、体外实验

（1）采用脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）构建EAM体外模型，分为：

对照组、模型组。

（2）Westernblot和qRT-PCR检测心肌细胞中UBE2E2、铁死亡相关蛋白

及mRNA表达，如GPX