烟雾病外周血小细胞外囊泡特异性miRNAs的筛选及功能验证.pdf

摘要

摘要

目的：

目前尚缺乏诊断烟雾病的特异性生物标记物。研究表明，外周血小细胞外

囊泡（sEV）内的微小核糖核酸（miRNAs）对多种疾病具有一定的诊断价值。

本研究旨在对烟雾病患者外周血sEV内的miRNAs进行测序分析，从中筛选出

烟雾病特异性miRNAs，并对目标miRNAs进行功能验证，以期探讨miRNAs

在烟雾病发病机制中的潜在作用，并为烟雾病的诊断提供一种特异性靶标。

方法：

招募60例在2020年11月到2022年12月期间于南昌大学第二附属医院神

经外科就诊的烟雾病患者以及同时间段相匹配的26例健康志愿者。收集烟雾病

患者的临床资料。采集烟雾病患者和健康志愿者外周血并分离sEV于-80℃保存。

miRNAs测序筛选烟雾病外周血sEV内差异表达的miRNAs，并通过定量逆转录

PCR（qRT-PCR）验证。绘制受试者工作特征（ROC）曲线以评价目标miRNAs

对烟雾病的诊断效能。根据qRT-PCR验证结果探讨目标miRNAs与烟雾病术前

脑卒中的关系。通过划痕实验、细胞增殖实验和小管形成实验探讨目标miRNAs

对人脑微血管内皮细胞（hCMEC/D3）血管生成功能的影响。

结果：

两组间的年龄、C反应蛋白和中性粒细胞百分比等基线数据无统计学差异。

测序结果表明，与健康对照组相比，烟雾病组外周血sEV内表达上调的miRNAs

有78个、下调的有41个。在ROC曲线分析中，miR-377-5p、miR-433-5p和

miR-1264的AUC分别是0.85、0.85和0.95。miR-433-5p在烟雾病缺血性脑卒

组显著高表达。miR-377-5p、miR-433-5p和miR-1264抑制hCMEC/D3的迁移。

miR-1264抑制hCMEC/D3的增殖，但miR-377-5p、miR-433-5p对其增殖无明显

影响。miR-377-5p、miR-433-5p和miR-1264对hCMEC/D3的成管功能无显著影

响。

结论：

烟雾病外周血sEV内的miRNAs存在显著的差异表达。miR-377-5p、

miR-433-5p和miR-1264可能是诊断烟雾病的潜在生物标记物。miR-1264可能

通过抑制hCMEC/D3的迁移、增殖参与烟雾病的发生发展。

II

Abstract

ABSTRACT

Objective:

Currentlythereisalackofspecificbiomarkersforthediagnosisofmoyamoya

disease(MMD).StudieshaveshownthatmicroRNAs(miRNAs)withinsmall

extracellularvesicles(sEV)ofperipheralbloodarevaluableforthediagnosisof

severaldiseases.TheaimofthisstudywastosequenceandanalyzemiRNAswithin

peripheralbloodsEVsfromMMDpatients,fromwhichtoidentifyMMD-specific

miRNAsandtoperformfunctionalvalidationofthetargetmiRNAs,inorderto

explorethepotentialroleofmiRNAsinthepathogenesisofMMDandtoprovidea

specifictargetforthediagnosis