基因工程抗体片段.pptVIP

双特异抗体的设计和运用化学交联：分别分离纯化两种亲本单抗，采用还原剂使其解链，获得单价抗体，再采用异双功能交联剂，把两种具有不同抗原特异性的单价抗体或其片段交联起来；细胞工程：采用细胞融合的方法，将分泌单抗的杂交瘤与经免疫的脾细胞结合，或者使两种分泌不同单抗的杂交瘤细胞融合；基因工程：多采用抗体分子片段，Fab、ScFV等经过基因操作修饰后，通过体外组装成BsAb或者直接表达分泌型的BsAb第30页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三第1页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三基因工程抗体片段之前奏曲

———小分子抗体第2页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三

第一代小分子抗体———抗原结合片段(fragmentwithantigenbinding，Fab)和重组FabFab片段由完整轻链和重链的VH+CH1构成，其大小为完整抗体的1/3,约55KD；重组Fab是将轻、重链可变区分别与人抗体的κ链和重链CH1重组；第3页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三

Fab基因工程构建方法及其性能通常是保留鼠源性的CDR区,其余换成人源化,通过大肠杆菌以分泌表达的方式表达L链和Fd链,二者能在细菌的外周质腔中折叠成具有一定构象的Fab；该Fab具有抗体的活性。因为其不含有Fc段、分子量小、结合力高、抗原性低,故在肿瘤治疗上有其优越性。目前已有多个片段药物获得FDA批准上市.第4页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三Fab的临床应用1）阿昔单抗(abciximab，ReoPro)1994年12月FDA批准的第一个重组Fab片段，该产品以血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa为靶点，用以防止血小板聚集及血栓形成，作为冠状动脉导管插术时预防心肌缺血的辅助用药，取得了巨大的成功；2）兰尼单抗(lucentis)：治疗黄斑变性，2006年获得FDA的批准。3）赛妥珠单抗(cimzia)：克罗恩病和风湿性关节炎，2008年获得FDA的批准。在临床研究中，Fab占据了临床研发抗体片段的大多数(30/54种)。第5页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三第二代小分子抗体———单链抗体(singlechainFv，ScFv)ScFv指在重链V区cDNA5’端与轻链V区cDNA5’端之间用一寡聚核甘酸连接,在大肠杆菌中表达成一单链多肽,并在细菌体内折叠成只由重链和轻链可变区构成的一种新型的抗体,大小仅为完整Ig的1/6(约28KD);是含有完整抗原结合部位的最小抗体片段；第6页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三ScFV的功能1）用于治疗：可进人一般抗体不能达到的部位,如蛋白偶联受体、酶活性部位和病毒表面的腔囊等；2）多肽接头可设计为具有特殊功能的位点：多肽接头是单链抗体的独特组成,可设计为具有特殊功能的位点：如金属赘合、连接毒素或药物等,用于影像和临床治疗；第7页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三第三代小分子抗体———纳米抗体和分子识别单位(molecularrecognitionunit，MRU)1.纳米抗体主要指仅由一个重链可变区组成的单域抗体(VHH)，其体积约为完整抗体的1/10，故称为纳米抗体；第8页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三纳米抗体的来源

1993年Hamers等偶然发现骆驼体内存在一种仅具有重链的抗体，被称为重链抗体(heavy-chainantibodies，HCAbs)。此后，在一些软骨鱼，如护士鲨体内也发现类似骆驼重链抗体结构的新抗原受体(newantigenreceptor，NAR)。这类抗体的抗原结合位点仅由重链的可变区VHH(variabledomainoftheheavychainofHCAbs，VHH)单结构域形成，尽管缺失轻链可变区，却仍具有良好和广泛的抗原结合力；克隆这种抗体重链的可变区，构建仅由一个重链可变区组成的单域抗体(VHH)。第9页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三第10页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三纳米抗体单域的性质1）有高度水溶性和构象稳定性：尽管缺失轻链可变区，却仍具有良好和广泛的抗原结合力。并且由于在框架FR2区存在一些不同于常规抗体的亲水性氨基酸，使得VHH抗体在水溶液中具有良好的稳定性。在苛刻的条件中，如胃液和内脏中仍能保持抗原结合活性，为口服治疗胃肠道功能紊乱性疾病提供新的思路；第11页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三2）纳米抗体能识别独特的抗原表位，由于具有伸