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巨大芽孢杆菌发酵培养基的优化

作者：饶彝，王亚平，李娜，等

来源：《湖北农业科学》2014年第15期

饶犇1,王亚平2,李娜3,周荣华1,廖先清1,刘芳1,陈伟1,张光阳1,杨自文1

（1.湖北省农业科学院生物农药工程研究中心，武汉430064；2.湖北大学湖北省工业生物技术重点实验室，武汉430062；3.云南省红河学院生命科学与技术学院/云南省高校农作物优质高效栽培与安全控制重点实验室，云南蒙自661100）

摘要：为了得到巨大芽抱杆菌（Bacillusmegaterium）发酵的最佳培养基，在单因子试验的基础上，应用Plackett—Burman设计法对影响芽抱产量的基本培养基组分中的关键因子进行了筛选，并进一步采用响应面分析法（RSM）对影响芽抱产量的关键因素最佳水平作了深入的研究。结果表明，影响巨大芽抱杆菌芽抱产量的关键因素是豆粕和淀粉的浓度。通过RSM的拟合和推算得到在豆粕和淀粉浓度分别为48.85和19.67g/L时，此时模型预测发酵最佳产量为43.16X108CFU/mL，验证值为42.2X108CFU/mL，预测值与验证值之间吻合较好，比原始培养基提高了约10倍。

关键词：巨大芽抱杆菌（Bacillusmegaterium）；Plackett—Burman设计法；响应面分析法（RSM）

中图分类号：Q813.1

文献标识码：A

文章编号：0439—8114(2014)15—3539—03

农业生产长期过分依赖化学肥料和农药，已经造成了农田土质和肥力下降，农作物品质降低，食品和地下水等环境污染也日趋严重。随着生态农业和绿色食品生产的兴起和发展，加之我国大多数土壤中速效磷、钾及其他一些养分的缺乏，微生物肥料作为生物技术发展和农业生产的一类重要肥源引起人们的重视。微生物肥料是指一类含有活微生物的特定制品，将它应用于农业生产中，能够获得特定的肥料供应。

磷是植物三大营养元素之一，土壤含磷较多，能被植物直接利用的却极少，绝大部分是以不溶性的无机磷或植物不能利用的有机磷形式存在。微生物通过产酸或产酶等作用可使这些无效形式的磷化物转变为植物可利用的养料。土壤中约半数的微生物可分解有机磷，其中应用较多的是巨大芽抱杆菌［1—6］。

巨大芽抱杆菌可以用来生产解磷肥，具有很好的降解土壤中有机磷的功效，是生产生物有机肥的常用菌种，也是制作水体处理剂的常用菌种。为此，探索其培养条件和发酵工艺，可为工业化发酵生产奠定基础。

本研究以实验室自行分离得到的巨大芽抱杆菌NRJD20121菌株为研究对象，对其培养基和培养条件进行Plackett—Burman试验，筛选出显著的影响因子，然后通过响应面试验组合设计，拟合出数学模型方程，从而找到最优条件组合，并对其试验结果进行评估，以期初步筛选出比较合适的培养基配方。

1材料与方法

1.1材料与试剂

菌种由实验室自行分离，经鉴定为芽抱杆菌属中的Bacillusmegaterium，编号为NRJD20121。

培养基固体培养基为LB培养基。种子培养基配方（g/L）:淀粉16,酵母抽提物4,K2HPO40.5,MgSO40.5；pH7.0。发酵培养基配方

（g/L）:淀粉15,豆粕25,KH2PO42,Na2HPO40.5,CaCO30.5,MgSO40.5,MnSO40.5。后期采用优化后的配方。

试验方法

1.2.1发酵培养条件接种体积分数为5%，发酵温度为30°C,摇床转速为200r/min，发酵48h。

Plackett—Burman试验采用Minitab的Plackett-Burman两水平法对培养基成分进行考察，筛选影响生物量和芽抱产量的重要因素，确定最佳配方。以可溶性淀粉为碳源，以豆粕为氮源，设置豆粕浓度为X1、KH2PO4为X2、Na2HPO4为X3、淀粉为X4、CaCO3为X5、MgSO4为X6、MnSO4为X7（表1）。

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