13应生张寿丽-实验二-光合色素的提取、理化性质-、-分离、吸收光谱及含量的测定.pdfVIP

13应生张寿丽-试验二-光合色

素的提取、理化性质-、-分别、

吸取光谱及含量的测定

专业：应用生物科学班级：13应生

姓名：张寿丽学号：134120258

试验二、光合色素的提取、理化性质、

分别、吸取光谱及含量的测定

一、试验目的：

1、把握光合色素的提取方法以及了解有关的理化性质。

2、把握光合色素的分别方法以及了解有关的吸取光谱。

3、把握用分光光度计测定叶绿素含量的方法。

二、试验原理：

1、光合色素能溶于具有肯定极性的有机溶剂，如丙酮、乙醇等。

2、提取液中无任何电子受体，因此可以观看荧光现象。

3、离体叶绿素在有氧气和光照条件下，发生光氧化作用，构造遭

到破坏，形成加氧叶绿素等产物。

4、叶绿素是一种双羧酸酯，可以发生皂化反响。

5、叶绿素分子中Mg2+与仆啉环结合不稳定，可以被H+、Cu2+、

Zn2+等离子所取代。

6、不同光合色素的分子量、分子构造、极性、溶解度、支持物对它

们的吸附力等不同，因而安排系数不同，故彼此可以分开。

7、叶绿素的卟啉环构造对光有很强的吸取，主要是红光和蓝紫光

。

8、混合液中的两个或多各组分，只要它们的光谱吸取峰不相互重

叠，仍旧可以依据Lambert-Beer定律〔A=kLC〕求出各

组分含。Lambert定律：A=kL；Beer定律A=kC。叶

绿素a、b在80%丙酮溶液中的Amax分别为663nm、645nm，

由此得出：见推导过程

Ca=12.7A663–2.69A645；Cb=22.9A645–4.68A663

Ca+b=8.02A663+20.20A645

9、A663=Ca.ka1+Cb.kb1

A645=Cb.kb2+Ca.ka2

分光光度计测出，故求二元一次方程组可得到此公式。

10、k——比吸取系数。即溶剂和波长不变的状况下，当物质的浓

度(C)为1g/L(0.1%)，比色皿的直径(光径，L)为1cm时所测

出的吸光度即为比吸取系数。

11、ε——摩尔吸取系数。即溶剂和波长不变的状况下，当物质

的浓度(C)为1mol/L，比色皿的直径(光径，L)为1cm时所测

出的吸光度即为摩尔吸取系数。

三、试验药品及仪器：

〔一〕、材料：

叶子花的叶片。

〔二〕、药品：

碳酸钙、石英砂、丙酮、30%KOH甲醇溶液、苯、50%醋酸、

醋酸铜、80%丙酮、石油醚。

〔三〕、仪器：

解剖剪、滤纸、漏斗、吸管、试管，三角瓶、洗耳球、离

心管、研钵、酒精灯、分光光度计、便携式叶绿素测定仪、离心

机、试管夹、试管架。

四、方法及步骤：

〔一〕、光合色素的提取：

将植物叶片洗净并用滤纸洗干，取1/2片叶片，放入研钵中

并参加少许CaCO3和石英砂及5ml丙酮，充分研磨，再参加10ml

丙酮，研磨，静止片刻，上清液过滤于三角瓶中，待用。

1、荧光现象：与光线垂直的方向观看色素颜色。

2、光破坏作用：1ml色素提取液于室内，1ml于太阳光下，

30min后观看颜色变化。

3、皂化反响：取一支试管，参加色素提取液2.5ml，再参加30%KOH

甲醇溶液1ml，摇匀，再参加苯2.5ml，轻轻摇动，沿试管壁渐

渐参加自来水1ml，轻轻摇动后观看，留意观看整个过程颜色的

变化。

4、取代反响：取一支试管，参加3ml色素，逐滴参加50%醋酸直

至溶液变为黄褐色。倒出一半，参加少许醋酸铜粉末，酒精灯

上加热，与另一半比较颜色的差异。

〔二〕、光合色素的分别和吸取光谱：

1、光合色素的提取：将植物叶片洗净并用滤纸洗干，取1/3片叶

片，放入研钵中并参加少许CaCO3和石英砂及5ml丙酮，充分

研磨，再参加10ml丙酮，研磨，静止片刻，上清液过滤于三

角瓶中，待用。

2、光合色素