负载VEGF的海藻酸钠_矿化胶原水凝胶促进3D打印钛合金微孔界面骨整合的研究.pdf

中文摘要

负载VEGF的海藻酸钠/矿化胶原水凝胶促进3D打印钛合金微孔界

面骨整合的研究

研究背景：

钛合金由于其优异的生物相容性，良好的机械性能以及可塑性被

广泛应用于制造临床植入物。采用三维打印（3Dprinting）技术制造

的多孔钛合金假体具有独特的多孔结构，不仅能够降低植入物的弹性

模量，还能够骨和血管的生长提供更多的空间。然而，钛合金植入物

仍然面临着一些挑战，包括较强的生物惰性以及疏水性,这导致了骨

整合不良的发生。为了解决这个难题，许多研究试图通过改变钛合金

的表面形态和化学成分来提高其表面生物活性。尽管这些方法已经显

示出一定的积极作用，但它们在提高成骨活性方面的有效性是有限的。

近年来，仿生假体界面的研究在生物材料领域受到了广泛的关注。一

些研究人员致力于创造一种具有类似于天然骨组织的组件和结构的

假体界面，以促进骨与植入物的直接结合。

矿化胶原蛋白（MC）是天然骨组织的基本单位，主要由1型胶

原蛋白（Col-1）（20%-30%）和羟基磷灰石（60%-70%）组成。Col-1

具有磷灰石晶体颗粒的成核位点，可以引导矿物晶体的生长和排列。

受仿生学的启发，研究人员合成了模仿天然骨组织成分的人工MC材

料，这类仿生材料在体内外均表现出优异的生物相容性和生物降解性，

并有效诱导骨与血管再生。原位沉积是制备矿化胶原的主要方法之一，

即将Ca2+和PO43-引入胶原溶液中，并将PH调节至中性，以触发胶

I

原纤维的自组装和矿化。尽管这种方法很简单，但所获得的矿化胶原

蛋白的机械性能极差，无法发挥其作为支架和涂层的生物作用。因此，

研究人员经常在矿化胶原蛋白中添加某些聚合物，赋予其更强的物理

化学性质和生物功能。海藻酸盐是一种天然聚合物，是从海带或马尾

藻中提取碘和甘露醇的副产品。在温和的条件下，海藻酸钠（SA）可

以与Ca2+交联，形成牢固的凝胶结构。一些研究表明，将藻酸盐添加

到胶原系统中会形成更厚的原纤维和具有Ca2+捕获能力的机械增强

水凝胶。此外，SA还赋予MC材料更大的灵活性。这是因为SA可

以用作多种治疗成分（细胞、抗生素和生长因子）的载体。与纯MC

相比，SA/MC复合材料可以更好地持续释放药物并长期保持生物活

性。血管内皮生长因子（VEGF）作为一种有效的血管形成诱导剂，

可以通过募集内皮细胞和上调MMP-2、HIF-1和KDR等各种基因来

诱导血管再生。通过将含VEGF的海藻酸钠混合到MC材料中获得

功能性矿化胶原（FMC）。FMC可以在体内潮湿的环境中缓慢释放信

号因子，在植入物周围形成浓度梯度，刺激BMSCs和血管内皮细胞

（VECs）向植入物中心迁移，完成细胞募集，促进血管再生，提供氧

气和营养，加速植入物界面处的骨再生。

在本研究中，我们开发了一种FMC来构建有利于成骨的细胞微

环境，并系统地检测了包括生物相容性，迁移和成骨分化在内的细胞

行为。将FMC与3D打印的钛合金多孔支架相结合，构建一种新的

生物活性假体界面（sTi/VEGF）。该假体界面被植入兔股骨远端的骨

缺损中，显微CT、推出机械测试、组织学评估和免疫组织化学染色

II

进一步证实，这种生物活性假体界面通过诱导局部骨和血管再生来增

强骨-假体界面的稳定性和结合力。

方法：

1.使用过电子束熔化法（electronbeammelting，EBM）制备的3D打

印钛合金微孔支架具有优异的机械性能，将功能化矿化胶原水凝胶填

充到微孔支架的孔隙中得到实验所需的生物活性界面（详见2.2.2）。

2.采用电子扫面显微镜观察支架的表面形貌和微孔参数并采用酶联

吸附实验（ELISA）测定VEGF在模拟体液中的释放速率。

3.将水凝胶注射到大鼠皮下，在不同时间点处死大鼠取出样本并称重，

从而得出水凝胶在体内环境中的降解速率。

4.在体外试验中，采用活死染色试剂盒与CCK-8测试复合界面的生

物相容性。采用细胞侵袭实验，划痕实验与小管形成实验评估界面对

人脐静脉