YB10016基于CleanertSLE高通量萃取血浆中维生素A与维生素E20161102.pdf

基于CleanertSLE高通量萃取血浆中维生素A与维生素E

一背景

维生素A对人体多种器官的发育以及人体正常生理机能的维护有不可或缺的作用，然

而过量摄入维生素A会引发毒副作用；维生素E作为一种抗氧化剂在体内的主要功能是保

护细胞的生物膜结构，最近发现维生素E也能调控基因表达，维生素E缺乏症虽少见，却

与新生儿发育不良和遗传代谢病相关。因此，准确测定人体内维生素A与维生素E具有重

要意义。维生素A与维生素E由于化学性质活泼，易被氧化，对这类物质的准确定量具有

很大的挑战。

本应用案例介绍一种液相色谱-串联质谱的方法，采用CleanertSLE96孔板净化血浆样

品，从血浆样品中萃取富集维生素A（视黄醇，VA）、α-生育酚（α-VE）和γ-生育酚（γ-VE），

实验方法具有良好的稳定性及可靠性，可为VA、VE临床研究提供一种解决方案。

二目标物信息

图1VA结构图

图2α-VE结构图

图3γ-VE结构图

三材料及仪器

CleanertSLE96孔板（200mg/well），CleanertM96生物样品前处理仪，CleanertV96样

品氮吹浓缩仪，96孔收集板，BonshellC18（2.1*100mm,2.7μm），以上产品均为天津博纳

艾杰尔科技有限公司产品；LC-MS/MS,API4000+（SCIEX）；VA、α-VE、γ-VE、d6-α-VE、

d4-γ-VE（以上5种标准品购自altascientific）；d6-VA（购自BUCHEMBV）；甲醇；甲酸；

水；异辛烷；异丙醇；2,6-二叔丁基对甲酚。

四样品处理方法

4.1样品预处理

由于VA与VE稳定性差，为防止被氧化，在实验中需要加入抗氧化剂，所用抗氧化剂

为2,6-二叔丁基对甲酚（BHT）。

取100μL血浆至洁净样品瓶中，加入内标溶液，再加入50μL异丙醇和50μL水溶液，

涡旋振荡混匀。

4.2SLE过程

上样：将预混合好的溶液全部上样，静置5min；

洗脱：2mL异辛烷/异丙醇(9/1，含1g/LBHT)洗脱，每次加入500μL，分四次洗脱，

合并洗脱液；最后一步洗脱结束，将CleanertSLE与收集板整体放到CleanertM96生物样

品前处理仪上，开启压力至0.02MPa，约30s，完全收集洗脱液。

将洗脱液在室温下用CleanertV96样品氮吹浓缩仪进行温和氮吹干，再使用500μL0.1%

甲酸甲醇（含1g/LBHT）复溶，进样检测。

五仪器检测条件

5.1HPLC条件

色谱柱：BonshellC18（2.1*100mm,2.7μm）

流速：200μL/min

柱温：30℃

进样量：5μL

流动相条件：100%有机相（0.1%甲酸甲醇）等度分离6min

5.2质谱条件

扫描模式：电喷雾电离正模式

采集模式：多反应监测（MRM）

表1参数信息

化合物保留时间/minQ1Q3CE

269.393.131

VA1.87

269.381.223

274.38833

d6-VA1.85

274.3