(36)--[8.6] “可视化定位仪” ------免疫荧光技术在食品检测.ppt

第八章免疫学技术在食品检测中的应用

8.5-8.6“可视化定位仪”--免疫荧光技术在食品检测中的应（下）

美国炭疽攻击事件：从2001年9月18日开始为期数周的生物恐怖袭击，有人把含有炭疽杆菌的信件寄给纽约、博卡拉顿、华盛顿等数个新闻媒体办公室以及两名民主党参议员。该事件导致5人死亡，17人被感染。2008年中联邦调查局把它的怀疑集中到布鲁斯·爱德华兹·艾文斯身上，其曾经在马里兰州弗雷德里克戴翠克堡政府生物防御实验室中工作。得知将被逮捕，服用大量对乙酰氨基酚自杀。911事件、生物恐怖主义事件.炭疽杆菌：G+芽孢杆菌属，致病菌中最大的细菌，引起某些家畜、野兽和人类炭疽病（人畜共患）的病原菌，炭疽杆菌对社会公共卫生和经济发展的危害。通过皮肤、呼吸道、消化道感染，以败血症、脑膜炎、支气管肺炎、消化道溃疡等，2-3天以以中毒性休克死亡。该菌芽胞抵抗力强，在干燥的室温环境中可存活20年以上，在皮毛中可存活数年。牧场一旦被污染，芽胞可存活20～30年。经直接日光曝晒100小时、煮沸40分钟、l40℃干热3小时、110℃高压蒸汽60分钟、以及浸泡于10%甲醛溶液15分钟、新配5%苯酚溶液和20%含氯石灰溶液数日以上，才能将芽胞杀灭。炭疽芽胞对碘特别敏感，对青霉素、先锋霉素、链霉素、卡那霉素等高度敏感。

炭疽杆菌的检测：常规检测、免疫荧光抗体检测。

48.5-6免疫荧光技术在食品检测中的应用（1）基本原理：根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗原或荧光抗体，再用这种荧光抗原或荧光抗体作为探针检测组织或细胞内相应的抗体或抗原。在组织或细胞内形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受外来激发光的照射而发生明亮的荧光（黄绿色或橘红色），可以看见荧光所在的组织细胞，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。食品检测项目：真菌毒素残留：黄曲霉、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉等毒素；激素残留：莱克多巴胺、克伦特罗、沙丁胺醇、己烯雌酚等；水产品：呋喃妥因代谢、呋喃西林代谢、呋喃它酮代谢、呋喃唑酮代谢、孔雀石绿、氯霉素；抗生素残留：磺胺、喹诺酮、喹乙醇等；量子点荧光法试纸条食品有毒有害物质、非法添加剂类、残留类、水质监测项目等；POCT：即时检验(point-of-caretesting)

8.5-6免疫荧光技术在食品检测中的应用（2）常用的荧光素及其特点：①异硫氰酸荧光素（fluoresceinisothiocyanate,FITC），是黄色或橙黄色的结晶粉末，易溶于水或酒精溶剂。最大吸收光波长为490-495nm，最大发射光波长为520-530nm。主要的优点是人眼对黄绿色较为敏感，通常样品中绿色荧光少于红色。②四乙基罗丹明（rhodamineB200、RB200)，褐红色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮。性质稳定，可长期保存。最大吸收光波长为570nm，最大发射光波长为590-600nm。这两种荧光素可与抗体球蛋白中赖氨酸结合，在蓝紫光激发下，分别出现鲜明的黄绿色及玫瑰红色。③四甲基异硫氰酸罗丹明（fluoresceinisothiocyanate,FITC），紫红色粉末，性质稳定。呈橙红色荧光，常与异硫氰酸荧光素的黄绿色对比鲜明，可配合用于双重标记或对比染色。④二氯三嗪基氨基，较新的荧光素。

8.5-6免疫荧光技术在食品检测中的应用（3）免疫荧光技术主要优缺点：优点：特异性强、敏感性高、速度快。缺点：技术程序较复杂；存在非特异性着色，因发生交叉反应等，结果判定的客观性不足。解决：对照设置（阳性、非特异性、阴性）以其他免疫学或微生物学方法来确认。

8.5-6免疫荧光技术在食品检测中的应用①直接免疫荧光法②间接免疫荧光法③补体法（4）常用免疫荧光方法：

8.5-6免疫荧光技术在食品检测中的应用④时间分辨荧光免疫分析技术（time-resolvedfluoroimmunoassay,TRFIA）：在荧光分析技术的基础上发展起来一种非放射性核素免疫分析新技术。原理：利用了具有独特荧光特性的镧系元素及其螯合物为示踪物，标记抗体、抗原、激素、多肽、蛋白质、核酸探针及生物细胞，以代替传统的荧光物质。根据镧系元素螯合物的发光特点，用时间分辨技术测量荧光，同时对检测波长和时间2个参数进行信号分辨，可有效地排除非特异性荧光的干扰，极大提高了灵敏度。时间分辨荧光免疫分析试剂盒HCG-时间分辨荧光免疫分析

免疫荧光技术在食品检测中的应用⑤荧光偏振免疫测定：一种利用物质分子在溶液中旋转速度与分子大小呈反比的特点，对荧光抗体进行检测的技术，是一种均相竞争荧光免疫分析法。荧光偏振免疫分析仪

（5）免疫荧光技术在食品检测中的应用①食品中农药、兽药残留的