地方流行性牛白血病诊断技术.docx

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前言

NV/T574—2023

地方流行性牛白血病诊断技术

1范围

本文件规定了牛白血病的临床诊断，样品采集与处理、病原学和血清学方法的技术要求。本文件适用于牛白血病的诊断，检测、检疫、监测和流行病学测查。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该目期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件，

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

地方流行性牛白血病enzouticbavineleukosis

一种以淋巴样细胞恶性增生，进行性恶病质变化和全身淋巴结肿大为特征的一种慢性，进行性、接触传染性肿瘤病。由反转录病毒科肿瘤病毒亚科中的牛白血病病毒(Bovineleukaemisvirus,BLV)引起。

3.2

聚合酶链式反应pulymerasechainreaction

利用一段DNA为模板，在DNA聚合酶和核苷酸底物共同参与下，将该段DNA扩增至足够数量，以

便进行结构和功能分析。

3.3

实时荧光PCRreal-timePCR

一种利用荧光信号、累积实时监测整个PCR进程的试验方法。

3.4

Cr值cyelethreshold

每个实时荧光PCR反应管内的荧光信号量达到设定的阀值所经历的循环次数。3.5

琼脂凝胶免疫扩散agargelimmunodiffusion

琼扩试验

在琼脂凝胶中进行的抗原抗体免疫沉淀反应，可用于血清学定型。

3.6

酶联免疫吸附试验enzyme-linkedimmanasorbentasay

由酶分子与抗体分子共价结合形成酶标记抗体。此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。通过此种酶标记抗体与吸附在固相载体上的抗原发生特异性结合，当加入底物溶液后，底物可在酶作用下出现显色反应。此种显色反应可通过酶标仪进行定量测定，从而通过底物的显色反应来判定有无相应的免疫反应。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

2

NV/T574—2023

AGID?琼脂凝胶免疫扩散(agargelimmunodiffusion)

DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonucleieacid)

EBL.:地方流行性牛白血病(enzootiehovineleukosis)

EL.ISA:酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorhentassay)

FBL:胎牛肺细胞(fetalbovinelung)

MEM:最低必需培养基(minimumessentialmedium)

OD;光密度(opticaldensity)

PCR;聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)

PBS;磷酸盐缓冲液(phosphatebufferedsaline)

PBMC;外周血单核细胞(peripheralbloodmononuclearcell)

5临床诊断

5.1易盛动物

各年龄段牛(包括耗牛、水牛以及野生牛类)均易感，肿瘤(淋巴肉瘤)常见于3岁以上的牛。

5.2传播途径

牛的各种体液(鼻和支气管液、唾液、血液、精液、牛奶)中均存在BLV,可通过血源性传播、分泌物传播、乳源性传播、寄生虫传播、精液和胚胎移植传播等多种途径传播，也可通过被血液污染的直肠检查用针头、手术设备，手套以及吸血昆虫等机械性传插。

5.3临床症状

5.3.1地方流行型

潜伏期一般为4年～5年，多发生于3岁以上成年牛，4岁～8岁牛感染率最高。最急性病例无前驱

症状即死亡。亚急性病例病程多为7d至数月，表现为食欲减退、贫血和肌无力。当肿瘤广泛生长时，体温可升高至39.5℃~40℃,病牛表现为生长缓慢，全身体表淋巴结显著肿大而且坚硬，依部位不同可导致病牛头偏向一侧，眼球突出，严重时被挤出眼眶，有的出现贫血，心脏受损，消化功能素乱，流产、难产或不孕，共济失调、麻痹等症状。

5.3.2散发型

犊牛多见于4月龄以下，主要表现为淋巴结对称性肿大。青年牛多见于18月龄～20月龄，出现全身淋巴结肿大，内脏特别