SNT 2473-2010芦笋枯萎病菌检疫鉴定方法.docxVIP

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T2473—2010

芦笋枯萎病菌检疫鉴定方法

IdentificationofFusariumoxysporumf.sp.asparagi

2010-01-10发布

2010-07-16实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局

发布

I

SN/T2473—2010

前言

本标准的附录A、附录B和附录C均为资料性附录。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准主要起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院。

本标准主要起草人：程颖慧、章桂明、王颖、龙海、徐浪、郑耘、杨伟东、陈枝楠、谭彦彩。

本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。

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SN/T2473—2010

芦笋枯萎病菌检疫鉴定方法

1范围

本标准规定了芦笋(AsparagusofficinalisLinn)种子及新鲜芦笋组织上的芦笋枯萎病菌(Fusari-

umoxysporumSchlecht.f.sp.asparagiCohen.Heald)的检疫和鉴定方法。

本标准适用于对来自芦笋枯萎病疫区的芦笋种子和新鲜芦笋组织的检疫。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

SN/T1809进出境植物种子检疫规程

SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样

3原理

3.1分类学地位

英文名：FusariumWiltofAsparagus

学名：FusariumoxysporumSchlecht.f.sp.asparagi.CohenandHeald1941

芦笋枯萎病菌属真菌界(Fungi),有丝分裂孢子真菌[1](Mitosporicfungi)、丝孢菌纲(Hyphomy-cetes),丛梗孢目(Monilales),瘤座孢科(Iuberculariaceae),镰刀菌属(Fusarium)。

3.2鉴定原理

该真菌可以通过种子传播，其为害症状、形态特征、培养性状、寄主范围等特征是其鉴定的依据。依

照这些特征能将该菌与其他真菌尤其是与芦笄上的其他致病镰刀菌区别开来。

4仪器和用具

4.1仪器

体视显微镜、光学显微镜(带显微照相装置)、测微尺、夫平(感量0.1g)、超净工作台、光照培养箱或

4.2用具光照培养架等。

4.2用具

紫外灯管、手持放大镜、滤纸、烧杯、培养皿、三角瓶、镊子、剪刀、载玻片、盖玻片、量筒、酒精灯、吸

管等。

5试剂和培养基

5.1试剂

琼脂粉、蔗糖、无菌水、1.25%次氯酸钠(NaClO)、75%酒精、蛋白胨、磷酸二氢钾(KH?PO?)、硫酸

镁(MgSO?·7H?O)、硫酸链霉素、硫酸新霉素、腈菌唑等。

5.2培养基

马铃薯蔗糖培养基(PSA)、腈菌唑培养基(MBA)和马铃薯葡萄糖培养基(PDA)。

6现场抽样

按照SN/T1809及SN/T2122规定进行取样。

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SN/T2473—2010

7实验室检验

7.1症状检查

受侵染的植株的症状参见附录A第A.3章

7.2保湿培养

7.2.1种子保湿培养

将检验样品用有效成分为1.25%的次氯酸钠(NaClO)溶液表面灭菌3min～4min后，用灭菌水洗涤两次，放在垫有3层已灭菌湿滤纸的培养皿中，每皿10粒，在20℃~22℃下放置24h后，-20℃冷冻24h,转至25℃培养箱或培养架上培养，黑暗和紫外光照各12h交替，14d后观察种子上是否出现

白色菌丝或霉状物。药剂处理过的种子需先洗去表面的种衣剂，再按照上述方法保湿培养。

7.2.2新鲜植物组织保湿培养

取待检样品的茎切成1cm长的小段，冲洗掉表面的泥土杂物后，在75%的酒精溶液中浸泡1min,经灭菌水洗涤后，用灭菌解剖刀横切成长度为1mm～4mm的小片，放置在垫有3层灭菌湿滤纸的培养皿中，每皿5片～10片，转至25℃培养箱或培养架上培养，黑暗和紫外光照各12h交替，观察植物残

体表面是否出现白色菌丝或霉状物。

7.3分离培养性状

保湿培养发现疑似带病种子或组织，表面消毒后置于MBA培养基上，20℃黑暗条件下培养5d以

上，培养基表