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番茄环斑病毒检疫鉴定方法

SN/T2670—2010

附录A

(资料性附录)

番茄环斑病毒相关资料

A.1寄主范围

ToRSV的自然寄主有天竺费属(Pelargowiumspp,),悬钩子属(Rwbusspp)、李属(Prurasspp.)

和烟草(Nicatiaaatabacam)等。在人工接种的情况下还可以侵染茄科，藜科、葫芦科、蓄微科和豆科的

100多种植物。

A.2病害症状

ToRSV主要侵染多年生植物，在桃和其他李属植物上表现黄芽花叶症状；桃、樱桃和一些李属植物上表现茎部蚀损斑和退化症状；李树被ToRSV侵染后产生褐色线条；ToRSV侵染苹果树后嫁接部位上方膨大，接穗和砧木连接处的树皮异常增厚并呈海绵状，剖开树皮后可发现明显的坏死线，苹果树也可出现衰退症状；ToRSV在红树莓(redraspberry)上表现环斑和衰退症状：葡萄等多种植物被ToRSV侵染后均可出现衰退症状。

A.3分布地区

ToRSV主要分布于美洲、欧洲、大洋洲、亚洲的一些国家；美国、加拿大、秘鲁、智利、保加利亚、德国、意大利、法国、前苏联地区、前南斯拉夫、塞浦路斯、澳大利亚和韩国、日本等。

A.4传播方式

A.4.1近距离传播

ToRSV在田间主要通过土壤中的剑线虫传插，剑线虫属中可能的传插介体有：Xiphinemaameri-

cann,X,californicum,X,incogaitam,X,orcidiam,X,riwsi,X,thornei,X,utahense,机械接种、种

子、花粉也能传播该病毒。

A.4.2远距离传播

ToRSV通过带毒种子、苗木、组培苗等繁殖材料的运输发生远距离传播。

SN/T2670—2010

附录B

(规范性附录)

双抗体夹心酶联免疫吸附测定

B.1试材

B.1.1酶联板的要求

使用质量有保证厂商生产的酶联板。

B.1.2包被抗体

特异性的番茄环斑病毒抗体。

B.1.3酶标抗体

碱性磷酸酯酶标记的番茄环班病毒抗体。

B.1.4底物

对硝基苯磷酸二钠(pNPP)。

B.1.5样品抽提缓冲液(pH7.4)

PBST1L

亚硫酸钠(Na?SO?)1.3

PVP(MW24000~40000)20g

叠氮钠(NaN)0,2g

4℃储存。

B.1.6包被缓冲液(pH9.6)

碳酸钠(Na?CO?)1.59g

碳酸氢钠(NaHCO?)2.93g

叠氮钠(NaN)0.2g

蒸馏水定容至1L,4℃储存。

B.1.7PBST缓冲液(洗涤缓冲液pH7,4)

氯化钠(NaCD

8.0g

磷酸氢二钠(Na?HPO?)

1.15g

磷酸二氢钾(KH?PO?)

0.2g

氯化钾(KCl)

0,2g

吐温-20

0.5ml.

蒸馏水定容至1L.。

6

SN/T2670—2010

B.1.8薛标抗体稀释缓冲液(pH7.4)

PBST1L.

BSA(牛血清白蛋白)或脱脂奶粉2.0g

PVP(MW24000～40000)

叠氮钠(NaN)

4℃储存，

20.0g

0.2g

B.1.9底物(pNPP)缓冲液(pH9,8)

氯化镁(MgCl)

叠氮钠(NaN)

二乙醇胺

0.1g

0.2g

97ml.

溶于800mL蒸馏水中.用盐酸调pH值至9.8.蒸馏水定容至1L.4℃储存。

B.2程序

B.2.1包被抗体

用包被缓冲液将抗体按说明稀释，加入酶联板的孔中，100pL/孔，加盖，37℃孵育2h,清空孔中溶液，PBST洗涤3次，每次3min。

B.2.2样品制备