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抗HIV1Tat蛋白单克隆抗体的制备及初
步鉴定
(作者:___________单位:___________邮编:___________)
【摘要】目的:制备抗HIV1Tat蛋白的单克隆抗体(mAb),
并对其进行初步鉴定。方法:通过动物免疫、细胞融合、克隆化制
备抗Tat蛋白的mAb,并用ELISA法对所得mAb的特异性、抗原
识别表位及相对亲和力等做了初步鉴定。结果:获得了3株抗Tat蛋
白的mAb,这3株mAb均能特异识别Tat蛋白。结论:获得了3株
杂交瘤细胞系,均可以稳定分泌抗HIV1Tat蛋白的mAb,有望为
HIV早期检测及HIV抗病毒治疗提供有用工具。
【关键词】HIV1Tat单克隆抗体
自1981年发现艾滋病以来,艾滋病(acquired
immunodeficiencydisease,AIDS)在全球迅速扩散,人免疫缺陷病
毒(humanimmunodeficiencyvirus,HIV)是引起AIDS的病原体。
HIV有许多结构蛋白以及调节蛋白,其中Tat蛋白是很重要的调控蛋
白之一,是HIV基因复制和表达调控所必需的[1]。Tat蛋白由2个
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外显子编码,其中第1个外显子编码l~72位氨基酸残基,第2个外
显子编码73~101位氨基酸残基。由第1个外显子编码的72个残基
的肽段具有完全的体外反式激活活性。Tat是HIV最早产生的病毒蛋
白之一,其入核后通过结合HIV长末端重复序列和反式激活效应元
件,进一步促进病毒RNA的产生,是病毒复制的重要激活分子[2]。
本研究中通过免疫BALB/c小鼠获得Tat蛋白的单克隆抗体(mAb),
并用ELISA等方法检测mAb的性质,为HIV早期检测以及抗病毒治
疗提供了新的思路。
1材料和方法
1.1材料
纯化的Tat蛋白由美国丹佛大学惠赠。BALB/c小鼠(6~8周
龄)购买第四军医大学实验动物中心。小鼠骨髓瘤细胞株Sp2/0为本
试验室保存。RPMI1640干粉培养基购自Gibco公司。小牛血清购自
四季青公司。酶标山羊抗小鼠IgG抗体购自TaKaRa公司。小鼠Ig
亚类检测试剂盒、福氏佐剂及PEG购自Sigma公司。
1.2方法
1.2.1动物免疫
取Tat蛋白28μL,加0.02mol/L的PBS(pH7.4)1.472mL使
成1.5mL浓度溶液,加等量福氏完全佐剂用三通器混匀制成油
包水的乳化液。在5只BALB/c小鼠的颈背部及双侧腹股沟皮
下多点注射,剂量为0.6mL/只,间隔3周后以同样方法(加不完全福
氏佐剂乳化)免疫,再间隔2周后取等量蛋白溶于生理盐水中经腹腔
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进行第3次免疫,最后1次免疫2周后测小鼠血清效价,选择血清效
价高的小鼠再经腹腔加强免疫,3d后取脾细胞进行融合。
1.2.2mAb细胞株的建立
取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,融合剂为相
对分子质量(Mr)1500的PEG。细胞融合及选择性培养均按常规
方法[3]进行。以10mg/L的Tat蛋白包
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