食品添加剂乳铁蛋白的质量规格要求生产使用工艺和检验方法,食品中该添加剂的检验.docx

资料四

乳铁蛋白

食品添加剂的质量规格要求、生产

使用工艺和检验方法，食品中该添

加剂的检验方法或相关情况说明

内蒙古伊利实业集团股份有限公司

、乳铁蛋白质量规格要求

（一）感官指标

项目

标准

检测方法

色泽

淡粉红色粉末。

取5克被测样品置于一洁净的白色搪瓷皿中，在自然光线下用肉眼观察其色泽和外观形态及其滋气味。

滋气味

具本产品特有的味道，无异味

组织状态

均匀、细密粉末，无吸潮、无结块。

正常视力下无可见杂质。

（二）理化指标

项目

标准

检测方法

总蛋白质％

N95.0

GB5009.5-2010

乳铁蛋白占总蛋白的比例

N90%

见本节“二、检验方法”

水分％

<8.00

GB5009.3-2010

灰分％

<5.00

GB5009.4-2010

铁饱和度

5-20%

见本节“二、检验方法”

pH

4.5-6.8

检测2%水溶液在20°C下的pH

颗粒度要求

40目筛分通过率N85%

标准师检测

50目筛分通过率N50%

溶解度

完全溶解，无肉眼溶物

取0.2克乳粉，置于50C、200mL水中，充分搅拌2分钟以上，静止后观察。

（三）微生物、污染物及真菌毒素指标

项目

标准

检测方法

菌落总数（cfu/g）

<1000

GB4789.2-2010

大肠菌群（cfu/g）

<10

GB4789.3-2010平板计数法

金黄色葡萄球菌（cfu/g）

<10

GB4789.10-2010平板计数法

酵母和霉菌（cfu/g）

<50

GB4789.15-2010

阪崎肠杆菌（cfu/g）

0/100g

GB4789.40-2010

沙门氏菌（cfu/g）

0/25g

GB4789.4-2010

铅（mg/kg）

<0.15

GB5009.12-2010

砷（mg/kg）

<0.2

GB/T5009.11-2003

黄曲霉毒素M]（pg/kg）

<0.5

GB5009.24-2010

二、检验方法

（一）用反相高效液相层析法测定乳铁蛋白的纯度

样品准备

对粉状乳铁蛋白，称出20mg乳铁蛋白样品，用MilliQ水配成20mL,1mg/mL的乳铁蛋白溶液，再通过0.2pm的乙酸纤维素膜进行过滤。

材料和试剂

（1） MilliQ水（超纯水18megohmresistivity）

（2） 95%的乙腊（氤化甲烷）（HPLC级）

（3） 1%的三氟乙酸（TFA）

2.1缓冲液准备

（1） 缓冲液A：100%MilliQ水

把1LMilliQ水装在1L的SCHOTT瓶中。

（2） 缓冲液B：95%的乙腊

分别量取50mLMilliQ水和950ml乙腊。把二者混合，通过0.45pm的滤膜进行过滤。储存在1L的SCHOTT瓶中。

（3） 缓冲液C：1%的三氟乙酸

用移液管量取25mL三氟乙酸放入200mLMilliQ水中，用MilliQ水补至250mL。转移到250mL的SCHOTT瓶中储存。

仪器设备

（1） 水基线体系控制和获得数据的设备（Empower）

（2） 水2695分离组件和2487双入吸收检测器

（3） 反相高效液相层析柱---AlltechprosphereC4300A150mmx4.6mm,withAlltechAll-guardGuard7.5x4.6mm.

高效液相层析的测量方法

4.1注射体积

50pL已过滤的乳铁蛋白样品或空白液注入柱中供分析。

时间（min）

流速

（mL/min）

成分

曲线

%A

%B

%C

0.00

1.0

73.3

16.7

10

10.00

1.0

35

55

10

6

11.00

1.0

18

72

10

6

13.00

1.0

18

72

10

6

15.00

1.0

73.3

16.7

10

6

4.3温度

柱子温度=35°C

样品温度=10°C

4.4检测

在波长280nm处检测乳铁蛋白，乳铁蛋白的洗脱时间大约9.7分钟。

过程与计算

5.1用Empower软件，用样品的层析谱减去空白溶液。

5.2结合整个样品的层析谱，算出全部蛋白的含量。然后结合乳铁蛋白的高峰区算出乳铁蛋白的百含量（以蛋白质为基数）。

5.3用下面的计算公式计算乳铁蛋白的百分含量（干重）：

乳铁蛋白的百分含量（十重）=［蛋白含量/（100-水分）］x乳铁蛋白的百分含量

其中：蛋白含量是用凯氏定氮法测定的蛋白含量

乳铁蛋白的百分含量是用高效液相层析法测定的乳铁蛋白含量

（二）乳铁蛋白铁饱和度的测定

原理

通过向乳铁蛋白水溶液中逐渐加入等分量的三价铁离子溶液直至乳铁蛋白铁饱和。该过程中乳铁蛋白铁饱和度的变化在465nm分光光度计下进行检测，当吸光值不再变化的时候说明