马流产沙门氏菌病诊断技术.docxVIP

1

NY/T570—2002

马流产沙门氏菌病诊断技术

1范围

本标准规定了马流产沙门氏菌病的病原学检查及血清学检查的技术要求。

本标准适用于马属动物马流产沙门氏菌病的诊断及检疫。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB4789.28—1994食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂

3细菌学检查

3.1器材

恒温箱、高压灭菌器、显微镜、灭菌试管、5mL灭菌注射器、煮沸消毒器、外科剪、棉棒、镊、载玻片、铂金耳、酒精灯等。

3.2培养基及试剂

3.2.1四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB),见GB4789.28—1994中4.14,4.15。

3.2.2沙门-志贺(SS)琼脂，见GB4789.28-1994中4.22。

3.2.3尿素琼脂，见GB4789.28-1994中3.15。

3.2.4糖发酵管，见GB4789.28—1994中3.2。

3.2.5蛋白胨水及靛基质试剂，见GB4789.28—1994中3.13。

3.2.6缓冲葡萄糖蛋白胨水、甲基红(MR)试剂及维培(VP)试剂，见GB4789.28—1994中3.4。

3.2.7三糖铁琼脂(TSI),见GB4789.28—1994中4.26,4.27。

3.2.8革兰氏染色液，见GB4789.28—1994中2.2。

3.2.9沙门氏菌属因子血清(26种，分型用)。

3.2.10昆明系小鼠，清洁级，体重17g～20g。

3.3检验程序

马流产沙门氏菌检验流程见附录A(资料性附录)。

3.3.1病料标本采集

3.3.1.1孕马流产胎儿，用外科剪无菌打开腹腔，用注射器吸取腹水或胃内容物注入灭菌试管中；或用外科剪取肝、脾、肾、心等置培养皿中。

3.3.1.2流产母马胎衣，用灭菌棉棒蘸取黏液或刮取胎衣病变组织置于试管中。

3.3.1.3公畜精液应于采精后，立即用注射器等吸取，注入试管中。

3.3.1.4幼驹关节病变局部用碘酒及酒精消毒后，以注射器吸取关节液或肿胀部渗出液，注入试管中

待检。

3.3.2显微镜检查

3.3.2.1操作方法

将病料标本涂于载玻片上，革兰氏染色，镜检。

2

NY/T570—2002

3.3.2.2结果观察

沙门氏菌为两端钝圆的中等大杆菌，有时近似球杆形，单独散在，着色良好，偶见菌体两端着色较深，革兰氏阴性。

3.3.3分离培养

3.3.3.1操作方法

用铂金耳钓取病料标本，接种于TTB增菌液中做增菌培养，同时接种于普通琼脂、SS琼脂做分离培养，于37℃恒温箱中孵育18h～24h。

3.3.3.2培养特性观察

见到下述培养特性时，符合沙门氏菌特性。

3.3.3.2.1TTB增菌液

生长良好，均匀混浊，管底有黏稠沉淀物。

3.3.3.2.2普通琼脂

正圆形、表面光滑、微隆起、闪光、半透明、边缘整齐的中等大菌落(直径2mm～4mm)。

3.3.3.2.3SS琼脂

正圆形、淡桔红色、半透明中等大菌落，产生硫化氢(H?S)的菌株，有时使菌落中心带黑色。

3.3.4生化特性鉴定

3.3.4.1操作方法

3.3.4.1.1初筛培养

用铂金耳选取上述可疑菌落，先接种于TSI培养基的斜面上，再穿刺接种于底层内，于37℃孵育18h～24h做初筛培养，如果下层培养基变黄色、混浊，并产生气体，上层斜面颜色不变仍为红色，有些菌株产生硫化氢时，则使培养基呈黑色。以上符合沙门氏菌的特征。

3.3.4.1.2鉴别培养

从符合沙门氏菌特征的上述斜面培养物上钓菌，分别接种于生化试验用培养基，37℃恒温箱孵育24h～96h。

3.3.4.2生化特性

生化特性见表1。

表1细菌生化特性

细菌名称

葡勸糖

乳糖

麦芽糖

甘露醇

蔗糖

卫矛醇

鼠李糖

山梨醇

木胶糖

伯胶糖

單糖

肌醇

杨苷

侧金盏花醇

靛基质

硫化氢

尿素

MR试验

Vd试验

动力

马流产沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌肠炎沙门氏菌都柏林沙门氏菌

田④④田

一1一

一

田田田

田田

④④田①

田√

田

田

/

④

④

④y

④

田√田①

一一一

一一

一一

一-一

一

+++