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NY/T558—2002

牛海绵状脑病诊断技术

1范围

本标准规定了诊断牛海绵状脑病(BSE)的技术要求。

本标准适用于牛海绵状脑病的诊断；也可用于其他动物的传染性海绵状脑病(TSE)的诊断。

2临床诊断

BSE病牛临床症状各种各样，病程多为数月至一年，最终死亡。当病牛出现以下全部或部分症状而又不能确定为其他疾病时，应怀疑BSE的可能。

a)行为异常：表现为不安、恐惧、异常震惊或沉郁；不自主运动，如磨牙、震颤；不愿接触水泥地面或进入畜栏等。

b)感觉或反应过敏：表现为触、视、听三觉过敏。对颈部触摸、光线的明暗变化以及外部声响过度

敏感，这是BSE病牛重要的临床表现。

c)运动异常：病牛步态呈“鹅步”状，共济失调，四肢伸展过度，有时倒地，难以站立。d)体重和体况下降。

其他动物的TSE临床症状不尽相同，但确诊须依靠实验室诊断。

3实验室诊断

发现可疑病例后，应进行采样，送专门实验室检测。

3.1采样

将牛头固定，用电锯从前额两牛角根部向枕骨大孔背侧缘方向锯开，使脑部暴露。用剪刀剪开脑膜并切断所有与脑部相连的神经和血管，取出整脑。大规模监测时，可用专用工具从枕骨大孔处，取出延脑部分即可。

3.2固定

将完整的脑组织浸入10倍体积的固定液(配方见附录A)中固定。一周后更换固定液，再维持一周。

3.3组织病理学诊断

3.3.1病料处理

3.3.1.1把固定好的脑组织取出，将大脑和小脑去除，横切脑干选取厚度为3mm～5mm的脑闩部延

髓、小脑后脚部延髓和前丘部中脑组织块。

3.3.1.2将选取好的组织块放入新配的固定液中再固定一周，其间更换固定液三次，并在水平摇床上

不断摇荡，以提高固定液的渗透力。

3.3.1.3将固定好的组织块放入流水中漂洗24b。

3.3.1.4放入下列不同浓度的酒精中脱水：a)75%酒精中2h;

b)85%酒精中2h;

c)95%酒精I中2h;

d)95%酒精Ⅱ中2h;

e)100%酒精I中2h;

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f)100%酒精I中2h。

3.3.1.5放入下列香柏油和二甲苯中透明：

a)香柏油中12h;

b)二甲苯I中1h;

c)二甲苯I中1h。

3.3.1.6按下述方法浸蜡：

a)软蜡中40min;

b)硬蜡中2h。

3.3.1.7将浸好蜡的组织块放入包埋框中用硬蜡包埋，冷却过夜。

3.3.1.8将石蜡块切成5μm厚的切片，用干净的载玻片贴片。

3.3.2苏木素伊红H-E染色

3.3.2.1试剂配制：见附录B。

3.3.2.2操作步骤如下：

a)二甲苯I中10min;

b)二甲苯Ⅱ中10min;

c)100%酒精I中2min;

d)100%酒精I中2min

e)95%酒精I中2min;

f)95%酒精I中2min;

g)85%酒精中2min;

h)75%酒精中2min;

i)自来水洗2min;

j)哈里斯酸性苏木精12min;

k)自来水漂洗2min;

1)酸性酒精10min;

m)自来水漂洗5min;

n)饱和碳酸锂蓝染30min;

o)自来水漂洗10min;

p)75%酒精中2min;

q)85%酒精中2min;

r)95%酒精伊红液中复染1min;

s)95%酒精中2min;

t)100%酒精中2min;

u)100%酒精中2min;

v)二甲苯I中2min;

w)二甲苯Ⅱ中2min。

3.3.3封片

用中性树胶封片。

3.3.4结果观察

在光学显微镜下(10×10,10×40)观察切片，若被检样品脑干灰质区特别是脑闩部位的孤束核、迷走神经背核、三叉神经脊束核等处的神经元核周质或神经纤维网胞浆中出现双侧对称性海绵状空泡病变，且空泡呈规则的圆形或椭圆形，周边整齐，则可判定为BSE感染。在正常情况下，动眼神经核和红核处的核周质也可能有少量空泡出现，但