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2024-04-23 发布于山东
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牛锥虫病补体结合试验方法.docx

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SN/T1350—2004

牛锥虫病补体结合试验方法

1范围

本标准规定了牛锥虫病补体结合试验方法。

本标准适用于牛锥虫病的抗体检测。

2试验材料

2.1器材

96孔“U”型微量板、10pL～100pl.可调移液器、培养箱、水浴锅、15ml.尖底离心管、离心机、

12mm×75mm试管。

2.2试剂

2.2.1溶血素：从生物制药厂购买，效价不低于1!1500。

2.2.2补体：选择成年雄性豚鼠3只～4只，绝食6h~8h后，从心脏采血，分离新鲜血清保存于普通

冰箱中备用。也可以购买冻干补体。

2.2.3锥虫病抗原、阳性血清和阴性血清；从生物制品厂购买。

2.2.4绵羊红细胞悬液的制备；见第A.1章。

2.2.5巴比妥缓冲液(简称VBS);见第A,2章。

2.2.6溶血标准比色孔的制备；见第A.3章。

2.3血清的处理

被检血清、标准阳性血清和标准阴性血清，使用前均需56℃灭活30min。

3预备试验

3.1溶血素效价的测定

3.1.1配制1;20的补体。

3.1.2溶血素稀释；将溶血素用VBS做11500,111000,111500,112000,112500,113000,1:3500,114000,1+4500,1+5000稀释。

3.1.3溶血素效价测定：取96孔“U”型微量版，按表1中各成分的量加人各孔中。

表1溶血素效价测定表单位为微开

补体

8008

2000×

2500X

3000X

3500×

4000X

4500×

5000X

:100

VBS

100

SN/T1350—2004

封板后于37℃~38℃放置30min,500g离心5min,检查结果。

3.1,4溶血素效价的判定：在溶血素对照全部溶血、补体对照和红细胞对照不溶血的情况下，参照标准比色孔(见第A.3章),完全溶血的溶血素的最高稀释倍数即为溶血素稻释度，一般溶血素稀释度为1:2000,在试验中使用2个溶血单位的溶血素。

3.2补体效价的滴定

3.2.1补体用VBS作系列稀释，分别为1:10,1:20,1:30,1:40,1:60,1:80,1:100,1:150,1:200,1:300,……。

3.2.2取96孔“U”型微量板，按表2滴定补体效价。

表2补体效价测定表(结果举例)

1:10

1:20

1:30

1:40

1:60

1:80

1:100

1:150

1:200

1:300

阳性直清

VBS

的性直潜

不容

不溶

全溶

都溶

部溶

不溶

全溶

不溶

全溶

全消

部溶

不溶

3.2.3补体效价的判定：补体效价是指阳性血清加抗原的孔完全不溶血，阳性血清未加抗原的孔以及阴性血清无论有无抗原的孔完全溶血所需补体最小的量即为一个单位补体。本例中一个单位补体为1:60稀释度的补体，正式试验时使用2个单位的补体，即1:30帮肾的补体。

3.3抗原效价的测定

3.3.1取96孔“U”型微量板，向各孔中分别加入VBS25pL。

3.3.2抗原和阳性血清分别作从1:20～1:220稀释，阴性血清作1:4稀释，设抗原、血清和VBS对照。

3.3.3每孔按不同稀

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