CAR-T细胞产品的质量控制和非临床研究——一般原则和关键问题 - 副本.docx

一、引言

嵌合抗原受体T（CAR-T）细胞是一种经基因工程化的T细胞，通常表达能识别特定肿瘤抗原的嵌合抗原受体（chimericantigenreceptor，CAR），进而激活免疫系统以消灭肿瘤。CAR通常包含三个结构域：识别肿瘤相关抗原的胞外域（如scFv）、信号转导结构域（如CD3ζ）和一个或多个胞内共刺激结构域（如可源自CD28、4-1BB、OX40等）。CAR-T细胞免疫疗法通常是从采集的患者血液中分离出T细胞，然后在GMP生产车间对其进行基因改造，通过逆转录病毒和慢病毒载体、转座系统（如SB转座系统）或直接将mRNA转导到T细胞内，使T细胞表面表达CAR。在生产车间对这些T细胞进行扩增后将其回输到患者体内，这种经过修饰的T细胞能够特异、高效地识别和杀死肿瘤细胞，从而达到在治疗肿瘤的同时又避免对正常组织的损伤。

在靶向CD19分子治疗B细胞恶性肿瘤（急性B淋巴细胞白血病及B细胞淋巴瘤等）的临床试验中，CAR-T细胞显示出令人振奋的疗效及较少的副作用。2017年8月31日，诺华（Novartis）公司宣布，美国食品药品监督管理局（FoodandDrugAdministration，FDA）已批准其开发的靶向CD19的CAR-T产品Tisagenlecleucel（曾用名为CTL019，商品名为Kymriah）上市，用于治疗B细胞前体急性淋巴性白血病（acutelymphoblasticleukemia，ALL）。不到两个月后，FDA又批准了第二个CAR-T药物上市，商品名为Yescarta（axicabtageneciloleucel），是KitePharma公司开发的同样靶向CD19的CAR-T疗法，用于治疗某些类型的大B细胞淋巴瘤的成年患者。针对其他恶性肿瘤的CAR-T细胞治疗也在不断进展。

目前已有500多项关于CAR-T的临床试验正在进行。对于恶性血液病，需要继续开展临床试验，以确定新靶点和新组合。对于实体肿瘤，需要研究更好的靶点，或优化不完善的靶点，以及克服肿瘤微环境中阻碍T细胞功能的障碍。中国是除了美国之外的第二大进行CAR-T临床研究的国家。截至2018年6月，中国进行的CAR-T临床试验占据了全球的30%左右。从目前临床研究的涉及范围与研究程度来看，CAR-T已经成为了一种不可替代的全新的免疫治疗疗法，未来CAR-T将会成为肿瘤治疗中一块重要的基石。

随着越来越多的CAR-T细胞产品申请临床试验和上市，由此带来的这类新产品的质量控制、有效性和安全性研究以及相关管理问题亟待解决。目前国内外关于细胞治疗和基因治疗产品的技术指导原则中对此有一些基本的叙述，但这些指导原则较为宏观，没有具体针对CAR-T细胞产品的技术要求和规范。本文在这些指导原则的基础上，结合CAR-T细胞产品的特点，进一步探讨其质量控制和非临床研究的一般原则，以及其中的几个关键问题。

二、CAR-T细胞质量控制和非临床研究的一般原则

图1总结了CAR-T细胞质量控制和非临床研究的一般原则。

图1CAR-T细胞治疗质量控制与非临床研究一般原则的结构示意图

（一）质量控制

CAR-T细胞产品目前还没有统一的技术标准，各个制造商在CAR设计、培养技术、基因导入的方法、其他淋巴细胞的去除方法等方面各自不同，对CAR-T细胞的质量控制需结合其具体的生产工艺情况和特点进行考虑。CAR-T细胞的生产过程应按照cGMP的要求进行。cGMP的意图是提供一个框架，以确保在受到良好控制的设施和设备中，由经过良好的定期培训合格的工作人员进行高质量的生产，同时需要一个广泛的系统来记录操作的各个方面以证明持续的合规性。CAR-T细胞产品的质量控制内容，须在参考国内外相关指导原则的基础上，从生物产品、细胞产品和基因治疗产品不同层次综合考虑其特性，进行全面的产品质量、安全性和有效性的检验。CAR-T细胞作为一种活的“药物”，其制备流程复杂，质量控制环节众多，需要对其进行全过程的质量控制。CAR-T细胞的质量控制包括对生产用材料的检验、生产过程控制的过程检验和成品的放行检验，应分别制定相应的检测指标和可接受的标准范围。另外，还应对CAR-T细胞产品进行生产工艺验证及稳定性研究等。

1.生产用材料的控制

CAR-T细胞生产用材料是指用于制备该细胞治疗产品的物质或材料，包括细胞、基因修饰用载体物质、培养基、细胞因子、各种添加成分、冻存液和辅料等。生产用材料直接关系到产品的质量，因此研究者应建立良好、规范的生产用材料的质量管理体系，包括使用风险的评估、生产用材料供应商的审计和质量检测等工作程序。

如果由同种异体供者提供T细胞，供者细胞来源应符合国家相关的法律法规和伦理的要求，供者细胞的获取、运输、分选、检验或保存等操作步骤应经过研究和验证，并在此基础上制定明