医用基因工程课件.pptx

第一章核酸的结构与功能一、核酸的種類與組成二、DNA的結構與功能三、RNA的結構與功能四、其他小分子RNA五、雙鏈RNA（dsRNA）一、核酸的種類與組成核酸的基本構成單位是核苷酸，是由多個核苷酸連接而成，又稱多聚核苷酸。（一）化學組成：堿基+戊糖+磷酸（二）種類：DNA/RNA兩類1.堿基2.戊糖3.核苷4.核苷酸5.核酸DNA/RNA比較核酸堿基核糖磷酸嘌呤嘧啶DNAA、GC、T去氧核糖磷酸RNAA、GC、U核糖磷酸堿基DNA/RNA均有A、G、C，但DNA中由胸腺嘧啶T替換了RNA中的尿嘧啶U。戊糖RNA中為β-D-核糖，DNA中為β-D-2-去氧核糖。核苷堿基和核糖通過糖苷鍵連成核苷：嘌呤類以N9與核糖C1相連，嘧啶類以N1與核糖C1相連。核苷酸任何核苷與磷酸縮合（磷酸化）生成的磷酸酯稱為核苷酸。由核糖核苷（或去氧核苷）生成的磷酸酯稱核糖核苷酸（或去氧核糖核苷酸）。根據縮合在C5上的磷酸數目又可組成：核苷一磷酸（NMP/dNMP）；核苷二磷酸（MDP/dNDP）；核苷三磷酸（NTP/dNTP）。（如圖）核酸由多個核苷酸通過C3-C5的磷酸二酯鍵連接而成的多核苷酸鏈。種類有DNA、RNA兩種二、DNA的結構與功能（一）DNA的一級結構（二）DNA的二級結構（三）功能（四）三鏈DNA（一）DNA的一級結構核苷酸中去氧核糖和磷酸的一樣，但由於堿基不同而帶有不同的遺傳資訊，通常稱為堿基序列（又稱堿基對，bp）。人類有3×109bp。（二）DNA的二級結構1.Watson-Crick雙螺旋結構模型兩條逆向（5’-3’/3’-5’）平行的去氧核糖核苷酸鏈彼此間以A=T，G≡C的堿基氫鍵相連。（如圖1-7）。由於不同濕度、離子強度，分子構象呈現多樣性（多態性）有A、B、B’、C、C’、C’’、D、E、S、Z等構象。由於雙鏈的扭結或進一步盤繞可形成三級結構等超螺旋結構，其意義：①使DNA體積壓縮變小，節約空間位置；②使DNA遺傳資訊獲得穩定儲存。（三）功能1.可提供64個遺傳密碼的遺傳資訊（如表）2.可按半保留方式進行複製，穩定傳代3.可通過轉錄mRNA合成蛋白質，可遵循遺傳的中心法則。逆轉錄酶的發現又使該中心法則得以修正可由RNA逆轉錄成cDNA。（四）三鏈DNA三鏈DNA由於雙螺旋的一股輕微旋轉、折疊後，該股中的堿基可與雙螺旋的堿基以Hoogsteen氫鍵相連如TAT、CGC、TAA、CGG。（如圖）三鏈DNA結構類型、意義：①可作為精確切割DNA的靶序列的“分子剪刀”②抑制基因表達（轉錄）（反義DNA基因治療）③影響DNA與蛋白質結合及DNA複製、轉錄等，此外，還有四鏈DNA。三、RNA的結構與功能通常為單鏈，T被U替代（T是U的甲基取代衍生物）；由核糖取代去氧核糖，因RNA由DNA轉錄而成，故保留有DNA遺傳資訊。RNA由rnRNA、rRNA、tRNA三種類型共同擔負著基因表達、表達調控和蛋白質合成的任務。四、其他小分子RNA（一）細胞核內RNA（hnRNA和SnRNA）（二）反義RNA（三）核酶（一）細胞核內RNA（hnRNA和SnRNA）DNA轉錄產物很不均一，故將mRNA前體稱為不均一核RNA（核內hnRNA）。此外，核內還存有小核RNA（SnRNA），約為70~300個核苷酸，可參與真核生物的RNA剪接。（二）反義RNA反義RNA：指能與特定mRNA互補結合的RNA片斷，其功能：①阻斷mRNA的翻譯②抑制DNA複製③可選擇性地關閉基因。意義：①參與基因調控②可用於基因治療（病毒、腫瘤）（三）核酶核酶是指具有催化活性的RNA，命名為核酶（ribozyme），又指“酶RNA”。酶RNA不用於RNA酶（Rnase），前者是RNA，後者是蛋白質。核酶呈錘頭狀（如圖）。由13個保守核苷酸殘基好個螺旋結構域構成的錘頭狀二級結構，剪切反應是在GUX序列的3’端自動發生。催化結構域（R）可據底物（S）和R在錘頭結構中的相對位置行使對S（底物）的剪接。功能：參加RNA剪切和降解。意義：①腫瘤的基因治療（人工合成錘頭狀核酶）②HIV-1等病毒病的治療五、雙鏈RNA（dsRNA）小分子的雙鏈RNA能引發轉錄後的基因沉默（Post-transcriptionalgenesilencingPTGS）或RNA干擾（RNAinterference，RNAi）。該dsRNA在Dicer酶作用下可被降解，進而發生基因干擾（或沉默），也就是說阻斷了基因的表達。（機理如圖）特點：①不同SiRNA序列可行使特異識別，切割作用②mRNA被切割後所產生的dsRNA在RNA依賴性RNA多聚物下可發生PCR擴增起放大干擾效應③dsRNA可進行人工設計合成，也可用於載體構建體外擴增或基因敲除工具，可應用於病毒病、腫瘤基因治療。第一節基因的概念