单基因病诊断详解.ppt

PCR的过程：变性（92-95；1分钟）复性（40-60；1分钟）延伸（72；1.5分钟）第32页,共58页，2024年2月25日，星期天5’3’3’5’变性5’3’3’5’特异引物复性5’3’5’3’3’5’3’5’DNA聚合酶延伸3’5’5’3’PCR第33页,共58页，2024年2月25日，星期天以?地贫基因诊断为例由于中国人α地贫80%以上为东南亚型缺失型（--SEA/）,该突变的缺失范围约20kb基因片段。因此，采用跨越断裂点PCR法（gap-PCR）,一次即可诊断出各种基因型。PCR的应用第34页,共58页，2024年2月25日，星期天第35页,共58页，2024年2月25日，星期天α1α2α1α2第36页,共58页，2024年2月25日，星期天Multi-PCR第37页,共58页，2024年2月25日，星期天PCR-SSCP1989年，Orita等建立的PCR产物单链DNA凝胶电泳技术。12345ab1：正常人；2,4,5：纯合体患者；3：杂合体(2的弟弟)左为泳动变位模式：a正常人；b纯合体患者第38页,共58页，2024年2月25日，星期天PCR-SSCPGAA→GAGTGT→TATCTC→CAC第39页,共58页，2024年2月25日，星期天第40页,共58页，2024年2月25日，星期天PCR-DHPLCDHPLC（变性高效液相色谱）进行基因突变检测的原理DHPLC进行基因突变检测是基于异源双链的形成和不同的双链与吸附拄的结合牢固程度不同。第41页,共58页，2024年2月25日，星期天一个杂合子个体，PCR产物一定含有野生型和突变型两种DNA，并且两者的比例为1:1，将PCR产物进行变性复性过程，杂交会形成同源双链和异源双链，同样，当把野生型和突变型PCR产物混合后，进行变性复性过程，杂交后会出现四种情