免疫检测技术的基本原理.pptVIP

作业1、何谓沉淀反应？何谓凝集反应？其抗原有特点？2、抗原抗体反应有何特性？3、抗原抗体反应的影响因素有哪些？4、常用的免疫标记技术有哪些？5、设计一ELISA试验来检测牛奶中黄曲霉毒素M1。第85页,共86页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第86页,共86页，2024年2月25日，星期天IFA——双抗体夹心法测抗原AB第53页,共86页，2024年2月25日，星期天IFA——结果判断第54页,共86页，2024年2月25日，星期天二、免疫层析测定（ICA）第55页,共86页，2024年2月25日，星期天层析法将金标的一株单抗吸附于下端的玻璃纤维纸上，浸入尿液，此金标单抗即被溶解，并随尿液上行，若尿中有相应抗原，既形成Ag-Ab-金复合物，当上行至中段醋酸纤维薄膜，即与下端的另一株单抗结合并被固定下来，显示阳性结果。其上方还有一条抗鼠二抗，待红色金标单抗上行此处即被固定下来，作为金标单抗质控的提示。此种方法称金标一步法。第56页,共86页，2024年2月25日，星期天兔抗鼠IgG鼠抗HCG单抗金标鼠抗HCG单抗尿液浸湿标志线手持端斑点金免疫层析试验（一）第57页,共86页，2024年2月25日，星期天斑点金免疫层析试验（二）尿样阳性弱阳性阴性无效质控线测试线第58页,共86页，2024年2月25日，星期天ICA——双抗体夹心法测抗原第59页,共86页，2024年2月25日，星期天ICA---竞争法测抗原免疫层析试验竞争法测小分子抗原原理图第60页,共86页，2024年2月25日，星期天ICA竟争法结果观察阴性阳性无效第61页,共86页，2024年2月25日，星期天ICA——间接法测抗体第62页,共86页，2024年2月25日，星期天ICA结果观察阳性阴性无效第63页,共86页，2024年2月25日，星期天IFA与ICA的比较IFAICA试剂形式渗滤装置及附加试剂试剂条试剂保存4~8℃6个月室温一年操作步骤3~51观察时间3min3~20min阳性反应颜色浓度操作结束颜色不变颜色逐渐加深第64页,共86页，2024年2月25日，星期天IFA穿流（FLOWTHROUGH）ICA横流（LATERALFLOW）第65页,共86页，2024年2月25日，星期天1、罗立新,缪珑,潘力,等.快速检测产单核李斯特菌免疫胶体金层析法的研究[J].中国卫生检验杂志,2006,16(2):154-156.2、赖卫华,熊勇华,陈高明,等.应用胶体金试纸条快速检测赭曲霉毒素A的研究[J].食品科学,2005,26(5):204-207.第66页,共86页，2024年2月25日，星期天3、谌志强,段惠莉,王新为,等.大肠埃希菌O157:H7的胶体金免疫渗滤法检测[J].中国公共卫生,2005,21(4):705-706.4、谢昭聪,宋志强,吕敬章,等.应用胶体金免疫层析法检测水产品中霍乱弧菌的研究[J].中国国境卫生检疫杂志,2005,28(3):163-165.第67页,共86页，2024年2月25日，星期天5、王中民,李君文,王新为,等.免疫金渗滤试验检测食品中沙门氏菌的研究[J].微生物学免疫学进展,2001,29(4):45-47.6、刘永德,汪毅,陈禹雷,免疫金探针快速检测禽流感病毒研究[J].上海交通大学学报:农业科学版,2005,23(3):321-324.第68页,共86页，2024年2月25日，星期天斑点金免疫渗滤试验ADCB阴性（未怀孕）阳性（怀孕）加尿样除去滤器加胶体金标记抗体加洗涤液结果判定第69页,共86页，2024年2月25日，星期天免疫印迹法图解SDS裂解病毒聚丙酰胺凝胶电泳-+95684512KD电转印至NC膜上置待测血清中，漂洗；加酶标抗抗体，漂洗；加底物显色1204124KD第70页,共86页，2024年2月25日，星期天第四节放射性核素标记技术一、常用标记方法二、标记免疫物的分离与纯化第71页,共86页，2024年2月25日，星期天R：放射性核素示踪高灵敏不直接探测待测物，而探测待测物上的标记信号(标记物的放大效应)I：免疫学反应高特异废除以往沿用的无机或有机试剂，代之以抗体为