免疫学免疫血清学技术.ppt

第21页,共46页，2024年2月25日，星期天第22页,共46页，2024年2月25日，星期天第23页,共46页，2024年2月25日，星期天第24页,共46页，2024年2月25日，星期天第25页,共46页，2024年2月25日，星期天免疫荧光抗体技术原理：异硫氰酸荧光素（FITC）原理：荧光素（F）+AbAbF(FITC)AbF+AgAg-AbF紫外光Ag-AbF第26页,共46页，2024年2月25日，星期天标记抗体的制备：抗原?免疫动物?抗体?提取IgG?标记?标记抗体的提纯?标记抗体的鉴定荧光抗体染色：标本制备?染色（直接法、间接发）应用：用AbF检测抗原（定性、定位）特点：敏感，需荧光显微镜第27页,共46页，2024年2月25日，星期天第28页,共46页，2024年2月25日，星期天第29页,共46页，2024年2月25日，星期天第30页,共46页，2024年2月25日，星期天免疫酶标记技术原理：常用标记酶：辣根过氧化物酶（HRP）酶标抗体的制备：抗原?免疫动物?抗体?提取IgG?标记（戊二醛法、过碘酸钠法）?标记抗体的提纯?标记抗体的鉴定常用免疫酶技术：免疫酶组织化学染色技术、酶联免疫吸附试验（ELISA）、斑点酶联免疫吸附试验（Dot-ELISA）应用：第31页,共46页，2024年2月25日，星期天第32页,共46页，2024年2月25日，星期天第33页,共46页，2024年2月25日，星期天放射免疫分析原理：竞争性RIA固相夹心RIAAg*(F)+Ab?Ag*-Ab(B)+Ag?Ag-Ab标记用同位素：3H、125I、32P、35S常用方法：液相放射免疫测定、固相非竞争放射免疫测定应用：用于药物、激素、酶、肿瘤抗原等测定第34页,共46页，2024年2月25日，星期天第35页,共46页，2024年2月25日，星期天中和试验（病毒、毒素中和试验）原理：病毒与抗血清中抗体特异结合后失去感染易感动物、鸡或鸭胚、细胞活性例1-NDV9～11d鸡胚24～48h鸡胚死亡-NDV+抗血清9～11d鸡胚鸡胚不死亡第36页,共46页，2024年2月25日，星期天例2口蹄疫病毒(FMDV)4～7d乳鼠乳鼠死亡FMDV+抗血清4～7d乳鼠乳鼠不死亡例3FMDV仔猪肾传代细胞(IB-RS-2)单层细胞细胞病变(CPU)：变圆、成串、空泡、变形、脱落、裂解FMDV+抗血清IB-RS-2单层细胞细胞无病变CPU第37页,共46页，2024年2月25日，星期天用途：1.用已知血清鉴定病毒——诊断病毒病2.用已知病毒检测血清抗体——诊断病毒感染，测定病毒免疫血清效价（中和价）第38页,共46页，2024年2月25日，星期天免疫检测新技术SPA免疫检测技术免疫胶体金检测技术：免疫胶体金光镜染色法、免疫胶体金电镜染色法、胶体金免疫层析法等免疫转印技术免疫核酸探针技术第39页,共46页，2024年2月25日，星期天细胞免疫技术一．E玫瑰花环试验原理：人、猪、牛、羊等的T细胞膜上的CD2是绵羊红细胞受体，马、猪的T细胞膜上的CD2是豚鼠红细胞的受体。第40页,共46页，2024年2月25日，星期天E花环第41页,共46页，2024年2月25日，星期天二.酸性α醋酸萘酯酶测定原理：酸性α醋酸萘酯酶?醋酸萘酯 α萘酚+醋酸离子+六偶氮副品红红色反应物