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大规模培养细胞技术

摘要：细胞培养工作始于20世纪初，现已广泛应用于生物学、医学各个领域，成为细胞与组织研究

的重要技术之一。近年来，随着基因工程和细胞工程技术的不断开展，动物细胞培养已成为大规模

生产一系列有商品价值的生物制品的重要宿主，当前人们已经能够生产多种单克隆抗体、激素、细

胞因子、病毒疫苗和具有特殊功能的效应细胞等。但是，实验室采用的细胞培养技术获得的细胞量

有限，不能满足生产的需求，必修改用超产培养技术方法方可获得大量细胞，目前这种技术种类繁

多，归纳起来有三大类：①贴壁培养法；②悬浮培养法；③固定化培养法。细胞体外培养技术的不

断开展和完善，为组织和器官培养以及现代生物技术前沿的转基因动物技术、克隆技术、干细胞定

向分化、体外受精、性别控制等一系列技术的开展奠定了根底。

关键词：细胞培养；贴壁；悬浮；固定化

前言

动物细胞培养开场于本世纪初1962年，动物细胞培养规模开场扩大，开展至今已

成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法，利用动物细胞培养生产具有重要医

用价值的酶、生长因子、疫苗和单抗等，动物细胞培养已成为医药生物高技术产业的重

要局部。利用动物细胞培养技术生产的生物制品已占世界生物高技术产品市场份额的

50%。动物细胞大规模培养技术是生物技术制药中非常重要的环节。本文对细胞的培养

工艺做一综述。

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1.细胞培养的定义

细胞培养是指从体内组织取出细胞模拟体内环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一

定营养条件下，使其生长繁殖，并维持其构造和功能的一种培养技术。细胞培养的培养

物为单个细胞或细胞群。

在医学遗传学研究中应用最广泛的是外周血淋巴细胞、皮肤成纤维细胞和各种能在

体外长期生长的细胞系。外周血淋巴细胞培养具有时间短、技术简便、可重复取材等优

点，它在临床染色体分析中使用最广泛。体外培养细胞株可在培养过程中发生自发的或

在外界作用下的转化，成为永久细胞系，也可直接建成永久细胞系，永久细胞系能在体

外无限制制的传代和生长。永久细胞系通常具有非整倍体细胞和各个细胞的核型不完全

一样特征。但细胞克隆的细胞系其这一特征可以不明显。

2.动物细胞培养的工艺

2.1贴壁培养法

贴壁培养是指细胞贴附在一定的固相外表进展单层培养。贴壁依赖性细胞在培养时

要贴附于培养容器的壁上，细胞一经贴壁就迅速铺展，然后开场有丝分裂，并很快进入

对数生长期。一般数天后就铺满培养外表，并形成致密的细胞单层。

贴壁培养系统主要有滚瓶、中空纤维、玻璃珠、微载体系统等，其中尤以滚瓶培养

和微载体生物反响器培养更为多见。

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滚瓶培养系统

培养贴壁依赖性细胞最初采用滚瓶系统培养。滚瓶培养的优势在于能增加供细胞贴

壁的外表积，同时温和的滚动有利于细胞生长。细胞接种在滚动的圆筒形滚瓶中，培养

过程中滚瓶不断滚动，在培养瓶滚动时，细胞有一段时间离开培养基，使细胞交替接触

培养液和空气，增加了气体的交换，有利于细胞生长。滚瓶培养具有构造简单，投资少，

技术成熟，重复性好，放大只需要简单的增加滚瓶数量等优点。但滚瓶培养也有其缺点，

劳动强度大，占地空间大，单位体积提供细胞生长的外表积小，细胞生长密度低，培养

时监测和控制环境条件受到限制等。

微载体培养系统

微载体培养技术于1967年被用于动物细胞大规模培养[1]