《食品微生物技术》课件——微生物的诱变育种.pptVIP

微生物的诱变育种目录/Contents01诱变育种的概念02诱变育种的环节03诱变育种的步骤04诱变育种的注意事项微生物的诱变育种01诱变育种的概念诱变育种就是利用物理的或化学诱变剂处理均匀分散的微生物群体，促进其突变频率大幅度提高，从中挑选少数符合育种目的的突变菌株，以供生产实践或科学实验之用。诱变育种的主要手段是使用合适的诱变剂处理大量而分散的微生物细胞，在引起绝大多数细胞死亡，使存活细胞的突变频率迅速提高，再设计既简单、快速又高效的筛选方法，进而淘汰负突变菌株，并把正突变菌株中少数变异幅度最大的优良菌株巧妙的挑选出来。02诱变育种的环节2个主要环节：诱变（随机）选用合适的诱变剂和诱变剂量处理大量均匀、分散的微生物细胞，以引起绝大多数细胞致死的同时，使存活个体中的突变频率大大提高。筛选（定向）设计有效的筛选方法，将少量正突变株中的优良菌株挑选出来。03诱变育种的步骤确定出发菌株同步培养制备单细胞(或单抱子)菌悬液挑取疑似突变菌落纯培养平板分离诱变处理诱变剂的选择与确定诱变剂量菌种的纯化选优突变株的初步筛选重复筛选选出突变株出发菌株的性能测定活菌浓度测定计突变菌落数，计算突变率用简单快捷的方法摇瓶发酵试验04诱变育种的注意事项（1）出发菌株的选择出发菌株指用于诱变育种的起始菌株。出发菌株的选择标准：具有有利性状（如高产、生长速度快、营养要求粗放、标记明显等），对诱变剂敏感。出发菌株的来源：野生型菌株；从生产中选育的自发突变菌株；诱变获得的高产菌株04诱变育种的注意事项（2）同步培养在诱变育种中，一般采用生理状态一致的单细胞或单孢子，所以诱变处理前，菌悬液的细胞应尽可能达到同步生长状态。温度培养基成份控制光照和黑暗交替培养诱导法机械方法离心方法过滤分离法硝酸纤维素滤膜法04诱变育种的注意事项（3）单细胞或单孢子菌悬液的制备菌悬液还要有合适的浓度，一般处理霉菌孢子或酵母菌细胞悬浮液的浓度大约106个／mL左右，放线菌或细菌密度大些，可在108个／mL左右。悬浮液的细胞数可用平板活菌计数，也可用血球计数器或光密度法测定，但以平板活菌计数较为准确。04诱变育种的注意事项（4）诱变剂选择与诱变剂剂量确定①诱变剂的选择（高效，简便）物理诱变剂：频度低、大损伤，难修复，且操作简便；化学诱变剂：频度高，点突变，易回复突变，操作麻烦。(NTG——超诱变剂）UV是最常用的一种诱变剂。04诱变育种的注意事项（4）诱变剂选择与诱变剂剂量确定②剂量的选择最适剂量：在提高突变率的基础上，既能扩大变异幅度，又能使变异向正突变范围移动的剂量。突变率随剂量的增加而提高，但到达一定程度后，再提高剂量,反而会使突变率下降。正变较多出现在偏低剂量中，而负变较多出现在偏高剂量中。在产量变异工作中，常采用相对杀菌率为70~75%,甚至30~70%的剂量。04诱变育种的注意事项（5）分离和筛选近年来，人们为了缩短筛选周期，尽量减少不必要的工作量，往往对筛选方法加以简化，以代替大量的摇瓶培养工作，并将初筛与复筛两个阶段结合在一起进行，其目的是利用形态突变直接淘汰低产变异菌株和利用平皿反应直接挑取高产变异菌株。①利用形态变异：需预先测定形态与产量的相关性04诱变育种的注意事项（5）分离和筛选透明圈法（蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶）；抑菌圈法（抗生素）；变色圈法（柠檬酸）、显色圈（氨基酸）；沉淀圈法（外毒素）②根据平板颜色反应直接挑选透明圈直径（H）/菌落直径（C）：产量高低*感谢您的聆听THANKYOUFORLISTENING