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-可编辑修改-
准确称取天山云杉种子0.1g，先加入1ml预冷的50mmol/L的磷酸缓冲液(pH7.0，内含1mmol/LEDTA)，研磨成匀浆，然后用4.5ml分两次冲洗研钵至试管中，4℃，10000r/min离心20min，上清液即为酶提取液，4℃保存用于ROS系统酶活性分析。
酶活性的测定
过氧化物酶(POD，EC1.11.1.7)活性的测定。
按照Chance和Maehly[6]的方法，并作如下修改:反应混合液为50mmol/L的磷酸缓
冲液(pH7.0，内含0.1mmol/LEDTA)2.9mL，2%HO
22
1.0mL，50mmol/L愈创木酚
1.0mL。测定时，反应混合液先在25℃水浴中预热，立即加入0.1mL酶液以启动反应，
以缓冲液调零，测定OD 值，每隔30s读数一次。取0—60s时间段，即1min反应
470
时间来计算酶活性。以每分钟OD
470
增加0.01的酶量为一个酶活单位，U·g-1。
计算公式:POD活性=ΔA ×V
470 t
×(0.01×t×FW×V)-1
1
注:ΔA :反应时间内吸光度的变化；V:酶提取液总体积，ml；V:测定用酶提取液体积，
470 t 1
ml；FW:样品鲜重，g；t:反应时间，1min
过氧化氢酶(CAT，EC1.11.1.6)活性的测定。
按照Aebi[7]的方法，并作如下修改:反应混合液为酶液0.2mL(空白管以失活的酶液代替)，50mmol/L的磷酸缓冲液(pH7.0，内含0.1mmol/LEDTA)1.5ml，蒸馏水1.0
ml。测定时，反应混合液和0.1mol/LHO 预先在25℃水浴中预热。取反应混合液，
22
加入0.1mol/LHO0.3ml，终体积为3ml，测定OD
值，每隔1min读数一次，共读4
22 240
min。以每分钟OD
240
减少0.1的酶量为一个酶活单位，U·g-1。
计算公式:CAT活性=ΔA ×V
240 t
×(0.1×t×FW×V)-1
1
注:ΔA :A－(A+A)/2；A:对照管的吸光度；A，A:样品管的吸光度；V:酶提取
240 0 1 2 0 1 2 t
液总体积，ml；V:测定用酶提取液体积，ml；FW:样品鲜重，g；t:反应时间，1min
1
超氧化物歧化酶(SOD，EC1.15.1.1)活性的测定。
按照Giannopolitis和Ries[8]的方法，并作如下修改:反应体系:50mmol/L，pH7.8磷酸缓冲液3.0ml，130mmol/L甲硫氨酸0.6ml，750μmol/L氮蓝四唑0.6ml，0.1mmol/LEDTA0.6ml，酶提取液0.2ml(对照管以失活的酶液代替)，蒸馏水1.0ml，20μmol/L核黄素0.6ml。混匀后，将一支对照管放置暗处，其他各管置于30℃光照为4000lx日
光灯下反应20min(要求照光情况一致，视酶活性高低适当调整反应时间)。至反应结束后，
用黑布遮住试管，终止反应。以避光的对照管作为空白，测定各管OD值。以抑制NBT光
560
化还原的50%为一个酶活单位，U·g-1。
计算公式:SOD活性=(A－A)×V×(0.5×A×FW×V)-1
0 s t 0 1
注:A:照光对照管的吸光度；A:样品管的吸光度；V:酶提取液总体积，ml；V:测定用
0 s t 1
酶提取液体积，ml；FW:样品鲜重，g
抗坏血酸过氧化物酶(APX，EC1.11.1.11)活性的测定。
按照Nakano和Asada[9]的方法，并作如下修改:反应混合液为50mmol/L磷酸缓冲
液(pH7.0，内含0.1mmol/LEDTA)，0.5mmol/LASA。测定时，反应混合液和6mmol/LHO 预先在25℃水浴中预热。取反应混合液2.9ml，加入酶液50μl，加入6mmol
22
/LHO50μl(终浓度为0.1mmol/L)以启动反应，终体积为3ml，以不加HO
作空白
22 22
调零，测定OD290值，每隔10s读数一次。取0—30秒时间段，即30秒反应时间来计
算酶活性。以
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