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知识影响格局格局决定命运

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细胞实验全集

细胞生物学添加时间：2008.10.28|作者：admin实验一普通光学显微镜与特殊显微镜的使用一、实验目的1.强化普通光镜结构和使用技能的知识，掌握让其发挥最佳效能的方法。

2.了解相差显微镜、荧光显微镜的构造和原理，并掌握它们使用方法。

二、实验原理（一）普通光学显微镜普通光学显微镜的构造主要分为三部分：机械部分、光学部分和照明部分。

机械部分：（1）镜座。（2）镜柱。（3）镜臂。（4）镜筒。（5）物镜转换器(旋转器)。（6）镜台(载物台)。（7）调节器：①粗调节器(粗螺旋)，②细调节器(细螺旋)。

照明部分：包括反光镜，集光器和光圈。

光学部分：（1）目镜，（2）物镜：装在镜筒下端的旋转器上，一般有3－

4个物镜，其中最短的刻有10符号的为低倍镜，较长的刻有40符号的为高倍镜，最长的刻有100符号的为油镜，此外，在高倍镜和油镜上还常加有一圈不同颜色的线，以示区别。

在物镜上，还有镜口率(N.A.)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数字越大，表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表：

物镜镜口率(N.A.)工作距离(mm)100.285.40400.650.391001.300.11表中

的工作距离是指显微镜处于工作状态(物象调节清楚)时物镜的下表面与盖玻片(盖玻片的厚度一般为0.17mm)上表面之间的距离，物镜的放大倍数愈大，它的工作距离愈小。

显微镜的放大倍数是物镜的放大倍数与目镜的放大倍数的乘积，如物镜为10，目镜为10，其放大倍数就为1010=100。

（二）相差显微镜人类的眼睛只能在光波的波长和振幅有差异时才能识别被检物体。波长决定颜色、振幅决定明暗。在镜检的标本中，经固定、染色的标本就具有上述两种差异称振幅差标本，振幅差标本用普通光学显微镜就可以看得清楚；另一类标本没有明显的波长和振幅的差异，但其各部分却有厚度、折射率的不同，因而具有一定的相位差，称为相位差标本，如活细胞就属于这类标本。相

位差标本用普通显微镜看不清楚。1953年荷兰物理学家塞尔尼克发明了相差显微镜。解决了活细胞直接观察的难题。

相差显微镜主要部件：

相差聚光器：普通聚光器的所在位置上由聚光镜和环状光阑构成。环状光阑是一种特殊的光阑装置，由大小不同的环状通光孔构成，不同规格的通光孔，按需要调转使用。

相差物镜：相差物镜是相差显微镜特有的重要装置。在相差物镜内的后焦面上装有种类不同的相板。相板由于前述的作用，造成视场中被检样品影像与背景不同的明暗反差，各具不同的效果。因物镜内相板种类或构成的不同，物镜在明暗反差上可区分为两大类：即明反差（B）或负反差（N）物镜和暗反差（D）或正反差（P）物镜。物镜的反差类别，用英文字母B或N和D或P标志在物镜外壳上，并兼有高（H，High）、中（M，Medium）和低（L，Low）等三种不同反应。

合轴调节望远镜：是相差显微镜一个极为重要的结构。环状光阑的像必须与相板共轭面完全吻合，才能实现对直射光和衍射光的特殊处理。否则应被吸收的直射光被泄掉，而不该吸收的衍射光反被吸收，应推迟的相位有的不能被推迟，这样就不能达到相差镜检的效果。

由于环状光阑是通过转盘聚光器与物镜相匹配的，因而环状光阑与相板常不同轴。为此，相差显微镜配备有一个合轴调节望远镜（在镜的外壳上标有CT符号），用于合轴调节。使用时拨去一侧目镜，插入合轴调节望远镜，旋转合轴调节望远镜的焦点，便能清楚看到一明一暗两个圆环。再转动聚光器上的环状光阑的两个调节钮，使明亮的环状光阑圆环与暗的相板上共轭面暗环完全重叠。如明亮的光环过小或过大，可调节聚光器的升降旋钮，使两环完全吻合。如果聚光器已升到最高点或降到最低点而仍不能矫正，说明玻片太厚了，应更换。调好后取下望远镜，换上目镜即可进行镜检观察。

绿色滤色镜：由于使用的照明光线的波长不同，常引起相位的变化，为了获得良好的相差效果，在光路上加透射光线波长为500－600nm左右的绿色滤色镜，使照明光线中的红光和蓝光被吸收。只放过绿光，可提高物镜的分辨能力。该滤色镜兼有吸热的作用，以利于活体观察。

相差显微镜的成像原理相差显微镜用较强的光作为光源，来自光源的直射光到达标本面时，可以发生衍射，衍射光比直射光相位延迟约1/4，直射光通光环状光阑，在物镜后焦面形成光环而衍射光在此不能聚焦。因此，直射光和衍射光在后焦面被分开，相差物镜的后焦面装有相板，相板的共轭区和并协区，分别涂上延迟相位的物质，直射光通过相板共轭区，衍射光通过并协区，如果是共轭区涂上相位延迟的物质，则直射光的相位被延迟1/4，这是直射光与衍射光的相位相同，发生相长干涉，使合成波的振幅比直射光振幅大