原创力文档- 1、本文档共13页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
分子生物学操作考核试题及评分标准
实验一：
质粒DNA的提取和纯化
步
考核目标及评分细则满分值
骤
1.明确实验目的（2分）
一5
2.理解实验原理（3分）
1.选择恰当的药品和仪器（2分）
二5
2.熟悉药品的配制（3分）
1.熟悉实验步骤（5分）
三10
2.清除实验注意事项（5分）
进行实验：
1、实验准备：制备含有相应抗生素的固体和液体LB培养基，将保存的
菌液涂布到固体培养基平板上培养单菌落（1～2天）。（5分）
2、挑取单菌落在含有对应于某一抗生素(如Amp或Kan)的LB培养液
（25mL）中接种，37℃振荡培养过夜，使细菌处于对数生长期（约
12－16个小时）。（5分）
3、吸取10mL培养液于eppendorf管中，12000rpm离心5分钟，弃去上
清液，可用微量移液器适当吸取残余上清。细菌沉淀于管底。（5分）
4、加入1mL溶液Ⅰ，用手指或涡旋振荡器剧烈弹震，使菌体充分悬浮，
室温下静置5min。（5分）
5、加入2mL新配制的溶液Ⅱ，盖紧管盖，上下温和颠倒eppendorf管2
－3回，以混匀内容物（千万不要剧烈振荡）,冰浴静置5min。（5分）
6、加入1.5mL浴冷的溶液Ⅲ，上下颠倒混匀数次，冰浴条件下静置5min。
四（4分）65分
7、12000rpm离心10min，将上清液移至新的eppendorf管中（约400µL）。
（4分）
8、加入等体积的酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），充分振荡混匀，12000rpm
离心5min。（5分）
9、吸取上层水相至新的离心管中，加入十分之一体积量的3mol/L的
pH5.2NaAc,再加入2倍体积（约1mL）的预冷的无水乙醇。（5分）
10.放入－20℃冰箱中静置30分钟，12000rpm离心15min。（4分）
11.弃去上清，加入1mL预冷的70%乙醇，12000rpm离心5min，洗涤沉
淀。（5分）
12.弃去上清，沉淀在室温下自然干燥。然后加入40µLTE溶液。（4分）
13.取5µL的质粒与2µL的6X上样缓冲液混合后，在0.8％的琼脂糖凝胶
上电泳检测。（5分）
14.将所获得的质粒DNA样品置于4℃冰箱中备用。（4分）
根据实验结果得出结论
五5分
实验后整理：
六1、废液倒入废液桶，固体物回收到指定容器中（5分）10
2、洗涤仪器并使其归位。（3分）
3、保持台面和地面整洁，实验后洗手。（2分）
实验二：
DNA浓度和纯度的测定
步
考核目标及评分细则满分值
骤
1.明确实验目的（2分）
一
文档评论（0）