胶体金生产工艺配方原则.ppt

1胶体金诊断试剂工艺配方原则

2内容一、和膜有关的配方和原理二、和金子垫有关的配方和原理三、和样品垫有关的配方和原理四、有关问题

3一、和膜有关的配方和原理电镜下的NC膜

4硝酸纤维膜生产工艺图

5孔径定义的问题

6孔径对侧向层析速度的影响

7不一样种类膜的IgG结合能力

8不一样种类膜的BSA结合能力

9为何蛋白会结合到膜上?结合力是什么?静电疏水力这两种结合力的效应是什么?使蛋白从溶液中分离出来长期结合作用

10静电作用力静电作用力是正负电荷互相吸引产生的作用力疏水作用力疏水作用力又称为疏水键。它是由侧链的疏水基团互相靠近.而形成的一种作用力。对维持分子的三、四级构造起着重要的作用。每一种蛋白质都具有疏水基团和亲水基团。

11蛋白质疏水性状和亲水性状当蛋白质溶解在溶剂中时，蛋白质处在非常稳定的状态，此时蛋白质的亲水基团展开在外，疏水基团收缩在内，亲水基团和水分子接触，保证了溶解性的状态；当蛋白质沉淀出来时，疏水基团展开，亲水基团收缩，此时为疏水状态，也展现不稳定的固体状态，疏水基团和其他固体物的疏水基团通过疏水作用力结合，到达固定的目的。

12蛋白结合到固相材料上蛋白结合到固相材料上是一种多环节过程取决于蛋白溶液扩散到固相表面蛋白从溶液中分离出来蛋白吸附到固相上蛋白重排到最低能态

13吸附过程溶液中的蛋白蛋白转移到表面区域吸附蛋白在表面重排

14多位点结合只有1个位点的结合是可逆的多位点结合使得蛋白稳定在固相表面，虽然其中的每个单位点都是可逆的

15影响蛋白结合的原因蛋白缓冲液使用的膜蛋白自身应用体系

16蛋白缓冲液没有通用的缓冲液，不一样的系统必须分别优化。作用：提供适合的PH,改善亲水性,增溶性,提高稳定性定律:“蛋白在缓冲液中越不稳定，蛋白结合力越强”

17缓冲液的优化离子强度对于蛋白从溶液中脱离出来很重要，少许的离子强度，蛋白难以从溶液中脱离沉淀出来，过量的的离子强度，溶液配制中就已会出现沉淀。pH蛋白在等电点最不稳定沉淀剂一般用醇减少蛋白的稳定性，也可润湿膜，减少膜带有的静电，利于结合包被。盐一般不会影响对某些蛋白，两性离子的盐类有助于蛋白结合减少信号强度，消假阳

18糖：对包被蛋白的稳定性有重要作用，减缓老化速度，也可以增长亲水力。惰性蛋白：对消除假阳有重要作用表面活性剂：增长亲水力，也可增色。

19缓冲液的基本成分多种缓冲系:Tris-HCl,PB,CB等盐类：NaCl糖：蔗糖，海藻糖等表面活性剂：Tween20，Tritonx-100等惰性蛋白：Casein等防腐剂：叠氮钠，卡松等

20推荐的起始缓冲液10mMPhosphatepH7.03%Ethanol

21“潜水艇”效应表面活性剂处理过的膜在使用时的常见问题由于使用的表面活性剂是水溶性的喷膜时这些表面活性剂被“冲走”了

22反应动力学流速增长,反应速率减低流速增长,检测时间缩短流速增长,敏捷度减少流速增长,试剂用量增长流速增长,背景减少距离增长,流速减少孔径增长,蛋白结合量减少

23二、和金子垫有关的配方和原理

和金子垫有关的工艺和配方有：1）标识工艺；2）金标稀释液3）金垫处理液

24标识工艺胶体金：一般指金的水溶液，又称金溶胶。---金以微小的粒子分散在水中所形成的金溶胶。其中分散的金颗粒直径一般在1~100nm之间，为负电荷分布。

25高质量结合物单个分散的颗粒圆形颗粒很少汇集这样得到的胶体稳定性和反复性好Clusterfree,highqualitygoldreagentClustered,poorqualitygoldreagent

26胶体金的生产胶体金的形成是还原HAuCl4.HAuCL4+e-Au0还原剂越强，得到的金颗粒越小生产40nm诊断用金颗粒一般用柠檬酸三钠

27胶体金颗粒的形成

28胶体金的生产2种重要环节直接形成分步形成大多数人用分步形成比较轻易控制颗粒大小，CV也比较小可以生产出大颗粒胶体金

29颗粒大小对胶体的影响

30蛋白标识原理蛋白质在等电点或稍偏碱的状况下，依托静电引力或疏水力或共价键，被牢固地吸附于胶体金颗粒表。由于蛋白质分子牢固地结合在金颗粒表面，形成一种蛋白层，从而制止了胶体金颗粒的互相接触，使该胶联溶液较为稳定。

31要点蛋白的预处理使用低浓度和对的的pH值，保证最小的汇集合适的蛋白量（可通过盐滴定进行评价）搅拌速度、容器的洁净程度、离心的速度

32盐滴定盐滴定不能衡量蛋白单层的形成盐滴定只能代表盐溶液中多少许的蛋白可以使胶体金稳定pH和时间都会有影响

33蛋白邦定作用