水产品化学指标的检测—吲哚的测定.pptx

吲哚的测定

——分光光度法;原理;吲哚是虾产品中重要的腐败代谢物，是由蛋白质中色氨酸经细菌脱羧酶的作用分解产生，虾产品从新鲜到腐败的变化范围内，吲哚含量呈正相关变化，其测定方法有高效液相色谱法和分光光度法等。;一、原理;二、试剂与仪器;二、试剂与仪器;2.仪器

（3）电子天平:感量为0.01g和0.1mg。

（4）分液编斗:125mL.和500mL。

（5）均质器。

（6）容量瓶:50mL。

;三、分析步骤;2.提取

称取试样25g~50g(取决于所预计的吲哚量)(虾干称取试样12.5g~25g，并加人等量水浸润2h)，移至均质器中，量取80mL乙醇，加入烧杯中，以3000r/min的速度均质5min。转入蒸馏瓶中，用少量乙醇冲洗均质器，加5滴消泡剂。

;将蒸馏瓶和蒸汽发生器连接，缓慢地供应蒸汽至开始蒸馏（通入蒸汽不可太猛以免产生过多泡沫）。给热汽发生器提供足够的热量，控制蒸汽发生器，使蒸馏瓶内保持80mL~90mL的体积，约45min内在接受瓶内收集约450mL馏出液，用少量乙醇冲洗蒸馏瓶，并入接收瓶中。

;将馏出液移至500mL分液漏斗中，加入5mL稀盐酸和5mL饱和硫酸钠溶液。依次用25mL、20mL和15mL三氯甲烷提取，每次用力振摇1min，放气静置分层，先将25mL和20mL三氯甲烧提取液合并到到另一500mL分液漏斗中，依次加入400mL水5mL饱和硫酸钠溶液和5mL稀盐酸洗涤，保留洗涤液，通过脱脂棉将合并的是取液滤入干燥的125mL分液漏斗中。再用同一洗涤液洗涤15mL三氯甲烷提取液，将三氯甲烷合并入同一125mL分液漏斗中。

;3.测定

加入10mL显色剂于合并的三氯甲烷提取液中，用力振摇2min，放气静置，使酸层尽可能地分层。取8.0mL酸层转移到50mL容量瓶中，用乙酸稀释定容，混匀。移取该溶液于分光光度计比色池中，在560m处测定吸光度A。将8.0mL显色剂用乙酸稀释定容至50mL.混匀，测定空白。

通过蒸汽蒸馏一组新制备的吲哚标准工作液，分别移取1mL、2mL、3mL、4mL和5mL按样品测定程序制备标准曲线，不加吲哚标准工作液，按同样方法测定蒸馏空白。

;四、结果表述;吲哚的测定

——高效液相色谱法;原理;吲哚是虾产品中重要的腐败代谢物，是由蛋白质中色氨酸经细菌脱羧酶的作用分解产生，虾产品从新鲜到腐败的变化范围内，吲哚含量呈正相关变化，其测定方法有高效液相色谱法和分光光度法等。;一、原理;二、试剂与仪器;二、试剂与仪器;三、分析步骤;称取5g试样（虾干称取2.5g样品，并加入2.5mL水浸润2h）于50mL具塞离心管中，腊入250μL内标标准中间溶液，加入20mL乙腈、涡旋混合1min。室温下避光超声10min，离心(4700r/min，3min)，液体部分转移至50mL容量瓶中，残渣再加入20mL乙腈重复提取一次，合开提取液，加乙腈定容至50mL，混匀，过0.22μm滤膜，供高效液相色谱仪测定。

;3.测定

（1）液相色谱条件

液相色谱条件如下：

色谱柱：C-18柱（ODS-2），250mm×4.6mm（内径），5μm，或相当者；

流动相：乙腈/水（65+35），等度洗脱

流速：1mL/min;

荧光检测器波长：激发波长λex=270nm，发射波长λex=340nm；

柱温：30℃；

进样量：20μL。

;（2）色谱测定

根据试样中被测样液的含量，选定浓度相近的标准溶液，待测物的响应值应在仪器检测的线性范围内，对标准溶液及样液等体积参插进样测定。以2-甲基吲哚为内标物，以吲哚和2-甲基吲哚的峰面积比值为纵坐标，以吲哚的浓度为横坐标，绘制标准工作曲线，用保留时间定性，内标法定量，得到样液中吲哚的浓度。

4.空白实验

除不加样品外，按样品测定步骤进行。

;四、结果表述