金黄色葡萄球菌 DNA 疫苗pcDN A3.1(+)－Minigene及其制备方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN101066463A

(43)申请公布日2007.11.07

(21)申请号CN200710041163.4

(22)申请日2007.05.24

(71)申请人上海大学

地址200444上海市宝山区上大路99号

(72)发明人陈宇光倪继祖沈彦萍

(74)专利代理机构上海上大专利事务所

代理人何文欣

(51)Int.CI

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

金黄色葡萄球菌DNA疫苗pcDN

A3.1(+)－Minigene及其制备方法

(57)摘要

本发明涉及一种金黄色葡萄球菌

DNA疫苗pcDNA3.1(+)－Minigene及其制

备方法。本发明构建的DNA疫苗

pcDNA3.1(+)－Minigene，通过免疫小鼠实

验显示，该DNA疫苗能刺激小鼠机体产生

明显和持久的特异性淋巴细胞增殖反应以

及一定水平的体液免疫，与相应的

pcDNA3.1接种的阴性对照组比较，差异具

有显著性(P＜0.05)。同时从攻毒实验的结

果来看，pcDNA3.1(+)－Minigene质粒能诱

导小鼠产生了抗金葡菌感染的抗体，对免

疫小鼠起到了免疫保护的作用。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.一种金黄色葡萄球菌DNA疫苗pcDNA3.1(+)-Minigene，其特征在于该疫苗具有

SEQNO5所示的碱基序列。

2.根据权利要求1所述的金黄色葡萄球菌DNA疫苗pcDNA3.1(+)-Minigene的编码

蛋白，其特征在于该疫苗具有SEQNO6所示的氨基酸序列。

3.一种根据权利要求1所述的金黄色葡萄球菌DNA疫苗pcDNA3.1(+)-Minigene的

制备方法，其特征在于该方法具有以下步骤：

a.Minigene的人工合成：根据，FnBP的配体结合基序(D1sub21-34/sub；

D3sub20-33/sub)和TRAP蛋白C末端的12个氨基酸的基因序列，设计重组融

合基因的序列如下：

CAAGGTGGCAATATCGTAGATATCGATTTTGATAGTGTACCTCAATTCGGTGG

ACACAATAGTGTTGACTTTG

AAGAAGATACAAGTTATTTTGAAAGATATCTATACCCAATAAAAGAA；

再根据上段基因设计上下游引物：

上游引物：

5’-

CAAGGTGGCAATATCGTAGATATCGATTTTGATAGTGTACCTCAATTCGGTGG

ACACAATAGTGTTGACT-3’

下游引物：

5’-

TTCTTTTATTGGGTATAGATATCTTTCAAAATAACTTGTATCTTCTTCAAAGTC

AACACTATTGTGTCCA-3’

上述引物互为模板进行PCR扩增，得到120bp的Minigene片段，回收纯化扩增产

物；

b.重组质粒pcDNA3.1(+)-Minigene的构建：根据Minigene末端20个核苷酸序列设

计上下游引物：

上游引物：

5’-TAAGCTAGCACCATGGGTCAAGGTGGCAATATCGTAGA-3’

下游引物：

5’-GCCGGTACCTTATCATTCTTTTATTGGGTATAGAT-3’

以步骤a所得Minigene片段作为模板进行PCR，扩增得到的片段用NheI和KpnI

双酶切后插入质粒pcDNA3.1(+)的NheI/KpnI之间，构成重组质粒pcDNA3.1(+)-

Minigene。

4.根据权利要求1所述的金黄色葡萄球菌DNA疫苗在制备预防金黄色葡萄球菌感

染引起的各种疾病疫苗中的应用。