提取分离和精制过程中蛋白质活性的稳定性和保存.pptxVIP

1蛋白质含有一定不稳定性和脆性。所以长久以来，含有生物活性形式蛋白质分离被认为是一项极其困难工作。2.1序言有机溶剂猛烈搅拌紫外线高温pH值影响蛋白质活性原因提取分离和精制过程中蛋白质活性的稳定性和保存第1页

22.2蛋白质三维结构蛋白质组织层次相关蛋白质四级结构三级结构2.2.12.2.42.2.22.2.32.2.5侧链基团和二级结构提取分离和精制过程中蛋白质活性的稳定性和保存第2页

3折叠与伸展2.3.12.3蛋白质失活活性可逆丧失2.3.2蛋白质稳定2.3.3热稳定蛋白质2.3.4提取分离和精制过程中蛋白质活性的稳定性和保存第3页

4当一些氨基酸残基侧链基团按照它们次序形成准确空间排列时，即能够称为活性位点时，就认为一个特定蛋白质含有某种生物活性。对许多蛋白质而言，这就是其特殊结合位点。提取分离和精制过程中蛋白质活性的稳定性和保存第4页

5其一，与活性位点相关，参加催化过程或与底物或受体结合过程。其二，氨基酸残基准确定位对促进和维持蛋白质三级结构是非常主要。蛋白质链中氨基酸残基有两个作用：提取分离和精制过程中蛋白质活性的稳定性和保存第5页

6*蛋白质变性(denaturation)本质在一些物理和化学原因作用下，其特定空间构象发生改变或被破坏，也即有序空间结构变成无序空间结构，从而造成其理化性质改变和生物活性丧失。不包括一级结构改变或肽键断裂。提取分离和精制过程中蛋白质活性的稳定性和保存第6页

7蛋白质在各种力和键相互作用下，多肽链从随机结构折叠成各种多样含有活性球状结构，但从熵角度来讲，随机状态自由能高于折叠状态，所以蛋白质结构更倾向于形成较无序和较伸展随机结构。折叠与伸展2.3.1“矛盾统一体”提取分离和精制过程中蛋白质活性的稳定性和保存第7页

8引发蛋白质不稳定原因是伸展过程。从天然活性状态伸展成较随机（无活性）状态时，有些蛋白质遵照简单一级动力学过程，而有些蛋白质则包含着1个或多个相互独立、相对稳定中间构象状态。所以伸展动力学有时简单，有时复杂，尤其是中间态表现出一定生物活性情况下。NU2U1D天然活性状态失活状态伸展状态1伸展状态2……隐藏疏水基表面积增大疏水基暴露提取分离和精制过程中蛋白质活性的稳定性和保存第8页

91）温度升高（蛋白质和酶）2）pH值改变（使蛋白质表面离子化或发生电荷相反改变，使得折叠构象失去稳定。）3）水溶液中其它溶质（与蛋白质肽链中N-H和C-O基团发生竞争性抑制）4）溶液中泡沫（泡沫可增大水-空气界面，造成空气氧化几率增大）5）金属离子有利于蛋白质结构稳定（蛋白质在折叠过程中使多肽链不一样部分侧链基团形成金属结合位点，当金属离子与之匹配后，可增加蛋白质整体稳定性。活性可逆丧失2.3.2提取分离和精制过程中蛋白质活性的稳定性和保存第9页

101）固定化：将天然构型蛋白质表面众多基团与刚性支撑物共价结合，可显著降低蛋白质伸展和失活概率。2）经过可溶性双功效试剂或底物与蛋白质特定部位共价结合，使其稳定。3）优先水合作用：一些溶质或一些盐存在情况下可使蛋白质分子内部疏水性基团不能溶剂化，从而维持天然状态稳定。蛋白质稳定2.3.3提取分离和精制过程中蛋白质活性的稳定性和保存第10页

11当前科学家已从嗜热菌中分离出各种蛋白质，其中包含许多主要酶类，它们热稳定性高于中温型细菌类似蛋白，而且，在细胞内生活情况下这种差异愈加显著。也就是说嗜热菌蛋白质热稳定性取决于两个方面：首先，其蛋白质天然结构愈加稳定；另首先，嗜热菌细胞内存在着促进热稳定性原因。试验证实，蛋白质一级结构中个别氨基酸改变，就可造成其热稳定性改变。至于终究有哪些氨基酸改变，还有待科学家深入研究。热稳定蛋白质2.3.4提取分离和精制过程中蛋白质活性的稳定性和保存第11页

12其次，能够经过基因工程技术引入单一位点突变来提升蛋白质稳定性：1）引入更多内部或表面二硫键2）增加内部氢键数目3）改变内部疏水堆砌4）增加表面离子键5）增加金属结合位点数目提取分离和精制过程中蛋白质活性的稳定性和保存第12页

13必需功效基团维持和正确空间排布是蛋白质含有活性基础。而任何非正常共价过程则会引发蛋白质活性丧失。①功效基团本身共价修饰，造成基团功效不能起作用。②蛋白质上任何基团共价修饰，使得三维结构受到破坏。2.4共价过程中造成失活提取分离和精制过程中蛋白质活性的稳定性和保存第13页

142.4.1活性中心上必需基团反应研究证实，一些含有化学反应化合物可与蛋白质功效性基团反应，造成蛋白质失活。①氧化剂②酰化剂③烷化剂④芳香环上替换提取分离和精制过程中蛋白质活性的稳定性和保存第14页

151）表面基团性质改变，会对蛋白质稳定性有着主要影响。Eg：蛋白质表面极性基团非极性基团