2023年版药典沉降菌检测操作规程.docx

江苏亚邦中药饮片第

江苏亚邦中药饮片

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题目：干净区〔室〕沉降菌监测标准操作规程

编码：

起草： 日期：2023年 月

日

颁发部门：质量部

修订日期： 年

月

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日期：2023年 月

日

生效日期：2023年

月

日

日期：2023

日期：2023年 月 日发放份数：

版次：第1版

分发部门：质量部、中心化验室

范围：适用于本公司干净区(室)的沉降菌的监测。

责任：沉降菌检测员。

内容：

根本概念：

菌落:细菌培育后,由一个或几个细菌生殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。

沉降菌：用GB/T16292-2023提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过特地的培育基在适宜的生长条件下生殖到可见的菌落数。

沉降菌菌落数:规定时间内每个平板培育皿收集到空气中沉降菌的数目，以个/皿表示。

测试原理:本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培育基平皿，经假设干时间，在适宜的条件下让其生殖到可见的菌落数，以平板培育皿中的菌落数来评定干净环境内的活微生物数，并以此来评定干净区的干净度。

测试方法：

使用的仪器设备和培育基:

高压消毒锅:使用时应严格依据操作规程进展。

恒温培育箱:必需定期对培育箱的温度计进展检定。

培育皿:一般承受φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培育皿。使用前将培育皿置于121℃湿热灭菌20min。

培育基:胰酪大豆胨琼脂培育基。

将培育基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培育基注入培育皿，每皿约15ml。待琼脂培育基凝固后，将培育基平皿放入32℃恒温培育箱中培育72小时假设培育基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培育基平皿应在2-8℃的坏境中存放。

测试时间:

对单向流，如A级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开头。

对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开头。

采样点数目及其布置:

最少采样点数目:沉降菌的最少采样点数可按表1确定。在满足最少测点数的同时，不宜满足最少培育皿数，见表2

干净度等级面积〔m

干净度等级

面积〔m2〕

注：表中的面积，对于单向流干净室，指的是送风面积，对于非单向流干净室，

指的是房间面积。

A、B级

C级

D级

＜10

2-3

2

2

≥10-＜20

4

2

2

≥20-＜40

8

2

2

≥40-＜100

16

4

2

≥100-＜200

40

10

3

干净度等级A

BCD

采样点的布置:

表2最少培育皿数

所需φ90mm培育皿数〔以沉降4h计〕14

2

2

2

除受干净区的设备限制外，取样点应在整个干净区均匀布置。

在日常监控时，那些与产品相邻近的区域，以及可能与产品直接接触的空气及设备四周应考虑增加取样点和取样次数(与产品非接触区相比，这些区域应视为关键区):人员活动频繁或人员较集中的区域也应视为关键区，需加强监控。

取样点一股布置在趾离地面0.8-1.0m之间或操作平台的高度。

取样时，取样没备会对气流产生干扰，取样时应避开可能对气流组织的干扰。尽量避开在回风口四周取样(距离lm以上)，且测试人员应在取样口的下风

侧，并尽量少走动。

测试步骤：

采样方法:

用无菌容器(如不锈钢储槽)将预先培育的培育皿(无菌平皿)带至待测区，将培育皿取出，放置在预先确定取样点，翻开培育皿盖，使培育基外表暴露0.5小时，再将培育皿盖上，盖后倒置。检测时登记培育皿翻开的起始时间和完毕时间。

培育：

全部采样完毕，将培育皿倒置于恒温培育箱中培育。32℃培育，时间为72小时。

每批培育基应有比照试验，检查培育根本身是否污染，可每批选定三个培育皿做比照培育。

菌落计数:

用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，是否有遗漏。假设培育皿上有2个或2个以上菌落重叠，可区分时仍以2个或2个以上计数。

留意事项：

测试用具要做灭菌处理，以确保测试的牢靠性、正确性。实行一切措施防止人为对样本的污染。

对培育基、培育条件及其他参数作具体的记录。

由于细菌种类繁多，差异甚大，计数时一般用透射光于培育皿反面或正面认真观看，不要漏计培育皿边缘生长的菌落，必要时用显微镜鉴别。

采样前应认真检查每个培育皿的质量，如觉察变质、破损或污染的应剔除。测试状态:

沉降菌测试前，被测试干净区的温湿度须到达规定的要求，静压差必需把握在规定值内。

沉降菌测试前，被测试干净区己经过消毒。

测试状态有静态和动态两种，在空调系统验流时、长期停产恢复生产前、设施设备大修复产前进展静态测试，在日常监测时进展动态监测。

测试人员:测试人员必需