辣椒红中辣椒素的测定 高效液相色谱法.pdfVIP

辣椒红中辣椒素的测定高效液相色谱法

1范围

本文件规定了辣椒红中辣椒素含量的高效液相色谱测定方法。

本文件适用于辣椒红中辣椒素含量的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T601化学试剂标准滴定溶液的制备

GB/T602化学试剂杂质测定用标准溶液的制备

GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

辣椒素capsaicinoids

在辣椒中产生辣味的N-香草基酰胺类生物碱物质的统称。

注1：其中辣椒碱、二氢辣椒碱和降二氢辣椒碱约占辣椒素总量的95%以上，是表征辣度的主要成分。

注2：本文件中辣椒素含量以辣椒碱、二氢辣椒碱和降二氢辣椒碱三种成分计。

4原理

辣椒红样品用甲醇提取辣椒素，过滤后经C18色谱柱分离，荧光检测器检测，以三种辣椒碱与合成

辣椒碱标准品的相对保留时间定性，通过三种辣椒碱相对合成辣椒碱的校正因子，采用外标法进行定量。

5试剂和溶液

本文件中所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和符合GB/T6682规定的一级水。

试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T601、

GB/T602、GB/T603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。

5.1甲醇：色谱纯。

2

5.2乙腈：色谱纯。

5.3冰乙酸：色谱纯。

5.4N-壬酸香草酰胺（合成辣椒碱）标准品（CAS号：2444-46-4）：纯度≥95%。

5.5标准储备溶液：称取标准品约10mg（精确至0.0001g），用甲醇溶解并定容至50mL容量瓶中，

得到浓度为200μg/mL的标准储备溶液，置于2℃～8℃避光保存，有效期为24个月。

5.6标准工作溶液：分别吸取标准储备溶液0.0125mL、0.025mL、0.050mL、0.125mL、0.250mL、

1.25mL于10mL容量瓶中，加甲醇稀释定容，得到浓度分别为0.25μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、

2.5μg/mL、5.0μg/mL、25.0μg/mL的标准工作溶液，置于2℃～8℃避光保存，有效期为6个月。

6仪器和设备

6.1高效液相色谱仪：配备荧光检测器。

6.2分析天平：感量为0.01mg和0.1mg。

6.3漩涡混合器。

6.4高速离心机：转速大于4500r/min。

7参考色谱条件

7.1色谱柱：C18色谱柱（4.6mm×150mm，5μm），或同等性能的色谱柱。

7.2流动相：1%冰乙酸溶液-乙腈，体积比为60:40。

7.3柱温：40℃。

7.4激发波长：280nm。

7.5发射波长：325nm。

7.6流速：1.5mL/min。

7.7进样量：10μL。

8分析步骤

8.1样品溶液的制备

称取辣椒红样品约0.5g（精确至0.0001g）于50mL离心管中，加入20mL甲醇，涡旋混匀至少1min，

在不小于4000r/min条件下离心5min以上，取上清液过0.45μm微孔滤膜，作为样品溶液备用。

8.2测定

8.2.1标准曲线的绘制

3

在7参考色谱条件下，分别将标准工作溶液注入高效液相色谱仪中，记录各浓度溶液对应的峰面积

值，以标准工作液的浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

8.2.2含量测定

将样品溶液注入高效液相色谱仪中，根据标准工作溶液中不同组分的相对保留时间（参见表1）定

性样品溶液中各待测组分辣椒碱、二氢辣椒碱、降二氢辣椒碱的色谱峰，由峰面积按照