404-ZL泰乐菌素发酵液检验操作规程.docx

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泰乐菌素发酵液检验操作规程编第1页共5页号：SOP-ZL-404

泰乐菌素发酵液检验操作规程

编

第1页共5页

号：SOP-ZL-404

版本号：00

发放日期

年 月 日

实施日期

年 月 日

颁发部门

质量科QA

制订人/日期

年

月

日

审核人/日期

年

月

日

批准人/日期

分发部门

质量科QC

年

月

日

目的：规定泰乐菌素发酵液及放罐发酵液的检验操作方法，确保公司产品质量。

范围：适用于QC室检验人员对泰乐菌素发酵液的检验。

职责：QC室检验人员对本规程的实施负责。

内容：

化学效价的测定

原理

在0.1mol/L的盐酸溶液中，泰乐菌素在290nm波特长有最大吸取，可用紫外分光光度法进展检测。

试剂

0.1mol/L盐酸：取浓盐酸9ml，加纯化水定容至1000ml，摇匀。

标准曲线制备

取约25mg泰乐菌素标准品于50ml容量瓶中，周密称定，用纯化水溶解、定容、摇匀，配成含量约为500u/ml的标准溶液，分别周密量取上述标准溶液0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml于25ml容量瓶中，用0.1mol/L盐酸标准溶液定容摇匀。设定光度计检测波长为290nm，使用1cm石英比色皿，以0.1mol/L盐酸标准溶液作为空白溶液调整仪器零点，测量溶液吸光度，以吸光度为横坐标，浓度为纵坐标，绘制标准曲线，计算标准曲线方程。要求：相关系数r≥0.999。

更换测定用仪器或仪器大修后需重制备标准曲线。

测定方法

样品预处理：

取样品约30ml，用粉末状分析纯硫酸铝调整pH值至2.5~3.0，滤纸过滤或用离心法

说明：本文件供内部使用，持有部门或人员应妥当保管，并负有保密义务；未经允许，任何人不得私自外借和复制！

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泰乐菌素发酵液检验操作规程

编号：SOP-ZL-404

版本号：00

得到发酵液清液。

稀释

依据样品的估量效价，用纯化水稀释，稀释后溶液估量效价在300~700u/ml范围内。具体稀释倍数见下表。

样品名称

稀释倍数

稀释过程

5

周密量取1.0ml

发酵液清液，参与4.0ml纯化水

10

周密量取1.0ml

发酵液清液，参与9.0ml纯化水

发酵液

15

周密量取1.0ml

发酵液清液，参与14.0ml纯化水

20

周密量取1.0ml

发酵液清液，参与19.0ml纯化水

25

周密量取1.0ml

发酵液清液，参与24.0ml纯化水

放罐

20

周密量取1.0ml

发酵液清液，参与19.0ml纯化水

吸光度的测定

周密量取样品稀释液0.5ml，参与0.1mol/L盐酸标准溶液12ml。设定光度计测量波长为290nm，使用1cm石英比色皿，以0.1mol/L盐酸标准溶液作为空白溶液调整仪器零点，测量溶液吸光度。

计算

化学效价〔u/ml〕=〔k×A+b〕×N

式中 k：标准曲线所得的直线斜率；A：所测样品的吸光度；b：标准曲线所得直线截距；N：稀释倍数。

HPLC法测发酵液组分

HPLC条件

色谱柱：C18 4.6mm×250mm，5m

检测波长：290nm

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泰乐菌素发酵液检验操作规程

编号：SOP-ZL-404

版本号：00

进样体积：20l

柱温：室温

流淌相：200g/l高氯酸钠溶液：乙腈＝60：40(pH值2.5±0.1)

流速：1.0ml/min运行时间：35分钟

记录图谱时间：1.5倍泰乐菌素A峰保存时间

相对于泰乐菌素A的保存时间：泰乐菌素C≈0.5A，泰乐菌素B≈0.7A，泰乐菌素D≈0.8A，泰乐菌素A峰的保存时间在11.0～14.0分钟之间。

试剂与溶液的配制

4.2.2.1 流淌相[200g/l高氯酸钠溶液：乙腈＝60：40(pH值2.5±0.1)]

称取360g高氯酸钠于2023ml烧杯中，参与纯化水，搅拌使溶解，稀释至1800ml，用1mol/L盐酸溶液调整pH值至2.5±0.1，用0.45μm的微孔滤膜过滤，倒入5000ml中，参与1200ml用0.45μm的微孔滤膜过滤